小胞体に局在するsyntaxin18の細胞内機能に関する研究

内质网突触蛋白18的细胞内功能研究

• 批准号: 01J02179
• 负责人: 広瀬 秀徳
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokyo University of Pharmacy and Life Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J02179/
• 关键词: 小胞輸送; SNARE; 細胞周期; チェックポイント

真核細胞内には、それぞれ異なる機能を持つ膜で囲まれたオルガネラが多数存在し、それぞれ特有のタンパク質が局在している。小胞輸送は、タンパク質を細胞外へ分泌したり、リソソームなどのオルガネラに輸送するための手段である。syntaxinは小胞と目的膜との融合に関与するタンパク質であり、少しずつ構造の異なる分子種がそれぞれ異なったオルガネラに分布している。syntaxin18(syn18)は小胞体に局在し、小胞体-ゴルジ体間の小胞輸送に関与するタンパク質である。我々はsyn18モノクローナル抗体を用いたsyn18結合タンパク質の検索を行い、新規タンパク質p31およびRINT-1、ZW10をsyntaxin18結合タンパク質として同定した。RINT-1はRad50(遺伝子の修復に関与)と結合するタンパク質で、G2/M期のチェックポイントに関与するタンパク質であり、ZW10は動原体結合タンパク質で、ダイニンの動原体への結合を助け、紡錘体形成のチェックポイント機能を持つタンパク質であった。酵母を使ったtwo-hybridアッセイの結果から、RINT-1とZW10およびp31とsyn18が直接相互作用していることが判明した。またP31、RINT-1, ZW10はsyn18複合体中でサブコンプレックスを形成しいて、ATPaseであるNSFの加水分解依存的にこのサブコンプレックスはsyn18から解離した。さらに培養細胞内でのZW10の過剰発現および、RNAi法によるZW10のノックダウンの実験からZW10が間期においては小胞体-ゴルジ体間の小胞輸送に関与することが示唆された。以上の結果、細胞周期のチェックポイントタンパク質として機能しているZW10とRINT-1が間期においては複合体を形成し、p31を介してsyn18と結合し小胞輸送に関与するが、細胞周期に依存した何らかの調節によってRINT-1とZW10はチェックポイントタンパク質として機能するのではないかと考えられる。チェックポイントに関与するタンパク質が小胞輸送に関与しているということは今まで報告されておらず、新しい知見である。これらの結果は小胞輸送と細胞周期の間に何らかのクロストークが存在する可能性を示唆する。

In eukaryotes, there are many different functions, and most of them exist in eukaryotes. Cell transport is a process of extracellular secretion and transport. Syntaxin is related to the fusion of small cells and target membranes, and its molecular species are distributed in different ways. Syntaxin18(syn18) is involved in cellular localization and intercellular transport. We have syn 18, syn18, syntaxin18, syntaxin18, syntaxin 1 RINT-1 has Rad50(related to gene repair), G2/M phase, ZW10 has Kinetic binding, Kinetic binding aid, Spindle formation, and Kinetic binding. Yeast makes two-hybrid P31, RINT-1, ZW10 and syn 18 complex are formed and dissociated from ATPase and NSF by hydrolysis. ZW10 was detected in cultured cells by RNAi, and the expression of ZW10 in cells was detected by RNAi. As a result, the cell cycle is dependent on the regulation of cell cycle quality and function. ZW10 and RINT-1 form interphase complexes. p31 mediates syn18 binding and cellular transport. This is a report on cell transport and new information. The results indicate the possibility of cell transport and cell cycle disruption.