アクチン細胞骨格を制御するWAVEの機能解析

控制肌动蛋白细胞骨架的 WAVE 功能分析

• 批准号: 01J06201
• 负责人: 佐々木 信成
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J06201/
• 关键词: アクチン; 微小管; WAVE; N-WASP; ラメリポディア; Arp2; 3 complex; 膜ラッフリング

アクチン細胞骨格を制御するWASPファミリーのWAVEに結合する蛋白質として酵母two-hybrid法を用いて同定された蛋白質は、N末端にあるFCHドメインにおいて微小管に局在し、またC末端にあるSH3ドメインにおいてN-WASPと結合することが明らかにされた。次に、N-WASPのArp2/3複合体を介したアクチン重合活性にこの蛋白質がどのような影響を与えるのか、精製タンパク質を用いたin vitroのアクチン重合再構成系を用いて解析した。N-WASPはその分子内結合による活性抑制を受けているため、単独ではあまり大きな活性を示さない。そこに精製されたこの蛋白質をN-WASPに加えたところ、その濃度依存的にN-WASPのArp2/3複合体を介したアクチン重合活性は上昇し、最終的にはほぼ最大の活性を示すまでになった。WASPファミリータンパク質は細胞膜の伸展においてArp2/3複合体と共に必須の因子であることが現在までに明らかになっている。このN-WASP結合蛋白質は細胞内でN-WASPの局在を変化させまたin vitroの系においてN-WASPを活性化することから、細胞膜の伸展時にも何らかの機能を果たしていることが推測された。そこでこの蛋白質の野生型、ΔSH3変異体をHeLa細胞内に発現させcell spreading assayを行なってその影響を観察した。この蛋白質は通常細胞内で繊維状の局在を示すが、spreadingしている細胞内では細胞の縁にアクチンと共に局在することが観察された。また、spreadingをしている細胞を固定、観察し、細胞の面積を測定したところΔSH3変異体を発現している細胞は細胞の広がりが抑制されることが明らかになった。以上のことからこの蛋白質はN-WASPのArp2/3複合体を介したアクチン重合活性の活性化因子であり、その活性は細胞膜の伸展に必要であることが示唆された。

The method of two-hybrid was used to determine the WASP protein, the N-terminal FCH, the microtubule, the microtubule, the C-terminal, the SH3, the N-WASP, the microtubule, the N-WASP. Secondary and N-WASP Arp2/3 replicates were introduced, and their coincident activity was detected. Protein clones, in vitro clones and clones were used to reconstitute the clones. The inhibition of intramolecular binding activity of N-WASP antigens was affected by the inhibition of intramolecular binding activity, and the inhibition of intramolecular binding activity was significantly higher than that of the control. The concentration-dependent N-WASP-Arp2/3 complex, which is dependent on the concentration, the highest activity, the highest activity, and the highest activity on the coincident activity, is shown in this report. The cell membrane stretching, the Arp2/3 complex, and the factors that affect the presence of WASP are important. The N-WASP binding protein, intracellular N-WASP, is responsible for the activation of N-WASP in the in vitro system, the activation of the N-WASP, and the stretching of the cell membrane. The protein was isolated from the wild type, Δ SH3 strain, HeLa, and intracellular cell spreading assay was detected. The protein profile is usually detected in the cell in the cell and in the cell in the spreading cell. The cells are fixed, observed, and measured on the surface of the spreading. The cells are fixed, observed, and measured. The cells are in good condition. The cells are in good condition. The cells are in good condition. The above proteins, N-WASP Arp2/3 complex, coincidence activity, activating factor, cell membrane extension, necessary and instigating activity.