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色素細胞と神経細胞発生機構における相異性と相互作用に関する研究

色素细胞与神经元发育机制的差异与相互作用研究

基本信息

批准号：
01J07882
负责人：
矢嶋伊知朗
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J07882/
关键词：
網膜色素上皮 RPE 神経網膜 neural retina Otx2 色素細胞眼発生ニワトリ

项目摘要

1.網膜色素上皮(RPE)細胞細胞におけるOtx2遺伝子の機能に関する解析RPE細胞で特異的に発現するOtx2遺伝子の眼発生段階における機能を解析するため、Otx2発現ベクター(pOtx2)および、dominant negativeタイプのOtx2発現ベクター(pENOtx2)を作成し、エレクトロポレーション法を用いてニワトリ胚眼胞領域への遺伝子導入を行った。pOtx2を導入し、発生させた胚では、RPE細胞の増殖が観察された。この結果は、Otx2遺伝子がRPE細胞の増殖を制御していることを示唆している。また、pENOtx2導入個体の場合、RPE細胞の分化が強力に阻害された。阻害された細胞は、神経様の形態及び遺伝子発現を示した。この結果は、Otx2遺伝子はRPE細胞の分化に必須であり、Otx2遺伝子非存在下では、予定RPE細胞は、神経細胞へと分化転換することが示された。pENOtx2を導入した個体では、pENOtx2が導入された細胞に隣接した細胞の分化転換も観察された。2.次に、神経細胞へ分化転換した細胞のより詳細な性質を明らかにするため、様々な神経細胞特異的なマーカータンパク質に対する抗体を用い、組織免疫染色を行った。その結果、RPEに隣接し、その発生系譜も近い網膜神経細胞マーカーは発現せず、脳神経細胞特異的なマーカーの異所的発現が観察された。この結果は、RPE発生においてOtx2を強力に阻害すると、それらの細胞は脳神経系の細胞へと分化転換することが示された。

1. Reticular pigment epithelium (RPE) cytosolic Otx2 primers were used to analyze the characteristics of RPE cytopathic acid. The detection of Otx2 phenotype was performed in the fetal segment of the human eye. The diagnosis was performed, the pOtx2 was detected by Otx2, and the pENOtx2 was detected by dominant negative. In the field of embryonic eye cells, this method is used to enter the field of embryonic eye cells. POtx2 was introduced into the plant, and the embryo was born. The cells of RPE were observed. According to the results of the experiment, the results showed that the control of RPE cell colonization in Otx2 children showed that they were instigated to do so. The combination of pENOtx2 and pENOtx2 cells and the differentiation of cells of RPE cells strongly hinder the disease. It hinders the cell, the shape and the appearance of the cell. The results showed that the differentiation of RPE cells in Otx2 mutants must be affected, that in the presence of non-existent RPE cells, in the predetermined RPE cells, in the differentiation cycle, and in the differentiation cycle, should be demonstrated. PENOtx2 was introduced into individual cells, pENOtx2 cells were transferred into cells and differentiated cells were detected. two。 In the second stage, the differentiation of the cell, the cell differentiation, the differentiation, the differentiation, differentiation and tissue immunostaining. The results of the test, the RPE connection, the health care system that is close to the network, and the detection results of the special computer system of the network. According to the results of the study, the results showed that RPE cells were strongly blocked by Otx2, and the cells were divided into cells and cells.