リンパ球活性化分子を応用したネコ免疫不全ウイルスワクチンの開発

利用淋巴细胞激活分子开发猫免疫缺陷病毒疫苗

• 批准号: 01J08741
• 负责人: 西村 順裕
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Osaka University (2002-2003)Yamaguchi University (2001)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J08741/
• 关键词: FIV; CD80; CD86; B7

本研究はリンパ球活性化分子を応用し、細胞傷害性T細胞を強力に誘導できるネコ免疫不全ウイルスワクチン開発を目的としている。ネコにネコCD80,CD86(fCD80,fCD86)を導入できたことを確認できる系を確立するために、昨年度に引き続き、fCD80,fCD86を認識するモノクローナル抗体の作製を行った。さらに、細胞傷害性Tリンパ球アッセイ系の確立を目指して研究を行った。成果は以下の通りである。1 昨年度に引き続き,fCD80あるいはfCD86の細胞外領域とマウスIgG定常領域との融合蛋白でマウスの免疫を試みた。また、並行して、全長のfCD80あるいはfCD86を発現する株化COS細胞を作出し、株化細胞による免疫を試みた。昨年度まで蛍光抗体法による鏡検によりハイブリドーマのスクリーニングを行ってきたが、より感度よく、客観的かつ効率的に行うため、cell ELISA法を導入した。今年度さらに数千クローンのハイブリドーマからの陽性クローン選択を試みたが、現在までに有用なものは得られなった。2 細胞傷害性Tリンパ球活性化の評価がインターフェロンγとCD69分子の発現にて行うことができる系をネコにおいて確立するため、以下の実験を行った。昨年度クローニングしたネコCD69相同体の細胞外領域を融合蛋白として発現し、ネコCD69に対するモノクローナル抗体の作製を試みた。大腸菌にてGST融合蛋白質として発現し、ウェスタンブロッティング法にて発現を確認後、精製した。マウス免疫後、上記方法と同様にハイブリドーマのスクリーニングを試みたが、陽性のクローンを得ることはできなかった。

The aim of this study is to induce the development of cytotoxic T cells by using activated molecules. The introduction of CD80, CD86 (fCD80, fCD86) was confirmed to be the first step in the establishment of the system. The introduction of CD80, fCD80, fCD86 was confirmed to be the first step in the production of antibodies. The establishment of cytotoxic T cells and the study of T cells and T cells were carried out. The results are below. 1 year ago, fCD80 was found in the extracellular domain of fCD86. In addition, full-length fCD80 and fCD86 were detected in cultured COS cells. In the past year, the light antibody method has been introduced into the field of cell ELISA. This year, the number of people in the United States is increasing, and the number of people in the United States is increasing. 2. Evaluation of cytotoxic T lymphocyte activation and development of CD69 molecule In the past year, the production of fusion proteins in the extracellular domain of CD69-like cells was studied. E. coli GST fusion protein was identified and purified. After the first step, the first step is to open the door to the next step.

项目成果

Kohmoto, M., Nishimura, Y.et al.: "Experimental mucosal infection with molecularly cloned feline immunodeficiency viruses"Clin. Diagn. Lab. Immunol.. 10(1). 185-188 (2003)

Kohmoto, M., Nishimura, Y.等人：“分子克隆猫免疫缺陷病毒的实验性粘膜感染”Clin。

Shimojima, M., Nishimura, Y.et al.: "CD56 expression in feline lymphoid cells"J. Vet. Med. Sci.. (in press).

Shimojima, M., Nishimura, Y.等人：“猫淋巴样细胞中的 CD56 表达”J.

Shimojima, M., Nishimura, Y.et al.: "Phenotypic changes in CD8^+ peripheral blood lymphocytes in cats infected with feline immunodeficiency virus."Microbes Infect.. 5(13). 1171-1176 (2003)

Shimojima, M., Nishimura, Y.等人：“感染猫免疫缺陷病毒的猫中 CD8^ 外周血淋巴细胞的表型变化。”微生物感染.. 5(13)。

Ikeda, Y., Nishimura, Y.et al.: "High Genetic Stability of TM1 and TM2 Strains of Subtype B Feline Immunodeficiency Virus in Long-Term Infection"J.Vet.Med.Sci.. (in press).

Ikeda, Y.、Nishimura, Y.等人：“B 亚型猫免疫缺陷病毒 TM1 和 TM2 菌株在长期感染中的高遗传稳定性”J.Vet.Med.Sci.（出版中）。

Shimojima, M., Nishimura, Y.et al.: "A feline CD2 homologue interacts with human red blood cells"Immunology. 105(3). 360-366 (2002)

Shimojima, M., Nishimura, Y.等人：“猫科动物 CD2 同源物与人类红细胞相互作用”免疫学。