リンパ球活性化分子を応用したネコ免疫不全ウイルスワクチンの開発

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本研究はリンパ球活性化分子を応用し、細胞傷害性T細胞を強力に誘導できるネコ免疫不全ウイルスワクチン開発を目的としている。ネコにネコCD80,CD86(fCD80,fCD86)を導入できたことを確認できる系を確立するために、昨年度に引き続き、fCD80,fCD86を認識するモノクローナル抗体の作製を行った。さらに、細胞傷害性Tリンパ球アッセイ系の確立を目指して研究を行った。成果は以下の通りである。1 昨年度に引き続き,fCD80あるいはfCD86の細胞外領域とマウスIgG定常領域との融合蛋白でマウスの免疫を試みた。また、並行して、全長のfCD80あるいはfCD86を発現する株化COS細胞を作出し、株化細胞による免疫を試みた。昨年度まで蛍光抗体法による鏡検によりハイブリドーマのスクリーニングを行ってきたが、より感度よく、客観的かつ効率的に行うため、cell ELISA法を導入した。今年度さらに数千クローンのハイブリドーマからの陽性クローン選択を試みたが、現在までに有用なものは得られなった。2 細胞傷害性Tリンパ球活性化の評価がインターフェロンγとCD69分子の発現にて行うことができる系をネコにおいて確立するため、以下の実験を行った。昨年度クローニングしたネコCD69相同体の細胞外領域を融合蛋白として発現し、ネコCD69に対するモノクローナル抗体の作製を試みた。大腸菌にてGST融合蛋白質として発現し、ウェスタンブロッティング法にて発現を確認後、精製した。マウス免疫後、上記方法と同様にハイブリドーマのスクリーニングを試みたが、陽性のクローンを得ることはできなかった。