ツメガエル発生過程におけるNek2の機能解析

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私はこれまでに、初期発生におけるNek2Bの機能解析を行い、Nek2Bが中心体の成熟に関与する事を明らかにしてきた。今年度は、後期発生過程で発現するNek2Aの機能解析を行った。Nek2AとNek2Bはスプライスバリアントであるため、Nek2Aのみを特異的に阻害するためにツメガエル受精卵にNek2Aの配列に特異的なモルフォリノオリゴおよびsiRNAを導入した。その結果、モルフォリノオリゴを導入した胚ではNek2A蛋白質の発現量が微減したに留まり、形態的な変化はほとんど見られず、siRNAを導入した胚ではRT-PCRでNek2AのmRNA量の減少が認められなかった。このため、Nek2A特異的中和抗体を作成し、現在機能阻害実験を遂行中である。また、初期胚発生特異的に発現するCdc25Aフォスファターゼの活性制御機構の解析を同時に行っている。Cdc25Aは中期胞胚期にChk1によってリン酸化され、分解される。私はCdc25Aが分解のみならず、Chk1により抑制される必要があることを見出し、この抑制にCdc25AのC末端領域のリン酸化が関与していること、C末端領域をリン酸化されたCdc25AはCdk-サイクリン複合体から解離することを見出した。また、このC末端のChk1によるリン酸化配列はCdc25Aのみならず全てのCdc25ファミリーに存在し、同様のChk1による制御を受けている事を明らかにした。