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ツメガエル発生過程におけるNek2の機能解析

非洲爪蟾发育过程中 Nek2 的功能分析

基本信息

批准号：
01J09808
负责人：
宇都克裕
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J09808/
关键词：
Nek2 中心体タンパク分解アフリカツメガエル中期胞胚遷移 Cdc25A

项目摘要

私はこれまでに、初期発生におけるNek2Bの機能解析を行い、Nek2Bが中心体の成熟に関与する事を明らかにしてきた。今年度は、後期発生過程で発現するNek2Aの機能解析を行った。Nek2AとNek2Bはスプライスバリアントであるため、Nek2Aのみを特異的に阻害するためにツメガエル受精卵にNek2Aの配列に特異的なモルフォリノオリゴおよびsiRNAを導入した。その結果、モルフォリノオリゴを導入した胚ではNek2A蛋白質の発現量が微減したに留まり、形態的な変化はほとんど見られず、siRNAを導入した胚ではRT-PCRでNek2AのmRNA量の減少が認められなかった。このため、Nek2A特異的中和抗体を作成し、現在機能阻害実験を遂行中である。また、初期胚発生特異的に発現するCdc25Aフォスファターゼの活性制御機構の解析を同時に行っている。Cdc25Aは中期胞胚期にChk1によってリン酸化され、分解される。私はCdc25Aが分解のみならず、Chk1により抑制される必要があることを見出し、この抑制にCdc25AのC末端領域のリン酸化が関与していること、C末端領域をリン酸化されたCdc25AはCdk-サイクリン複合体から解離することを見出した。また、このC末端のChk1によるリン酸化配列はCdc25Aのみならず全てのCdc25ファミリーに存在し、同様のChk1による制御を受けている事を明らかにした。

Nek2B function analysis in the early stages of development, Nek2B development and development of the central body The functional analysis of Nek2A was carried out during the development process of this year and later. Nek2A and Nek2B are introduced into Nek2A's fertilized eggs by siRNAs specific to Nek2A's alignment. As a result, the expression of Nek2A protein decreased slightly, morphological changes increased, and siRNA was introduced. The mRNA level of Nek2A decreased by RT-PCR. Nek2A specific neutralizing antibody was produced, and now the function is blocked. The analysis of the activity control mechanism in the early stage of development is carried out simultaneously. Cdc25A is a protein that can be isolated and decomposed during the metaphase embryo stage of Chk1. Cdc25A is dissociated from Cdk1 and Cdk2 by Cdc25A C-terminal domain acidification. Cdc25A and Cdc25C are the same as Chk1 and Cdc25A is the same as Cdc25C.