权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

サーカディアンリズム発現に関わる神経ペプチドPDFの受容体同定と前駆体局在の解析

参与昼夜节律表达的神经肽PDF的受体鉴定及前体定位分析

基本信息

批准号：
01J10281
负责人：
本田健
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J10281/
关键词：
概日リズム PDF PDF前駆体モノクローナル抗体 PFD前駆体

项目摘要

PDF(Pigment-Dispersing Factor)は、昆虫脳において概日リズムに関わる神経ペプチドである。最近、このPDFが神経伝達物質として働くことや、神経終末のみならず細胞核でも時計機構に関与することなど、新たな事実が明らかにされた。本研究の目的は、コオロギPDFの存在様式、受容体等について解析し、概日リズム発現の分子機構を明らかとすることである。コオロギPDF前駆体はN端側からPAS、PDF領域からなる。今年度は、神経細胞内におけるPDF、PAPおよび前駆体タンパク質の存在様式を解析する目的で、PDF前駆体タンパク質の各領域に特異的な抗体を用いた解析を実施した。現在、PDFとPAPが切断を受けていない、つまり前駆体のみを特異的に認識するモノクローナル抗体(前駆体認識抗体)、前駆体から切り出しを受けた成熟PDFのみを認識する抗体(成熟PDF認識抗体)、PDF-C端アミド構造を特異的に認識する抗体(PDFアミド認識抗体)、PAP領域を特異的に認識する抗体(PAS認識抗体)を得るのに成功している。これら一連のモノクローナル抗体を用いて、コオロギ脳-視葉における免疫染色を試みた。その結果、成熟PDF認識抗体、PDFアミド認識抗体、PAP認識抗体では、いずれもlaminaおよびmedullaと呼ばれる部位に存在する時計ニューロンの細胞体および軸索を明確に染色されることが判明した。さらに興味深いことに、前駆体認識抗体では、それらのニューロンの細胞体のみしか染色されなかった。このことは、PDT前駆体は時計ニューロンの細胞体に局在しており、そこでプロセシングを受けることを示唆する。また、前駆体認識抗体と他の抗体との組み合わせによる共免疫染色を行って、前駆体ペプチドや成熟PDF、PAPペプチドの局在部位の相互関係を調べたところ、プロセシング後の成熟PDFおよびPAPペプチドはともに軸索に局在する(輸送される)ことが初めて明らかとなった。また、時間帯による各々のペプチドの存在量(免疫染色性の強度)には、有意の差は見られなかったことから、PDFのリズム発現は、プロセシング段階で起きているわけではないことが示唆された。一方、PDF受容体の同定は、放射ラベルPDFを用いた昆虫脳ホモジネートに対する結合試験を実施予定であり、現在、結合試験系確立のための条件検討中である。

PDF(Pigment-Dispersing Factor)は、Insect 脳において合日リズムに关わる神経ペプチドである. Recently, このPDFが神経伝达物として働くことや、神経End的のみならずThe cell nucleus is a timepiece mechanism, and it is a new one. The purpose of this study is to analyze the existence formula and acceptor of PDF and analyze the molecular structure of the present study.コオロギPDF front body はN end side からPAS, PDF field からなる. This year's analysis of the current year's internal structure of the cell, PDF, and analysis of PAP's internal structure The purpose of the analysis is to analyze the antibodies that are specific to each field in front of the PDF. Now, PDFとPAPがcut offけていない、つまり前槆体のみをSpecial recognitionするモノクローナルantibodies (former body recognition antibodies), former body recognition antibodies (Mature PDF recognition antibody), PDF-C-terminal アミド structure specific に recognition する antibody (PDF アミド recognition antibody), PAP domain specific に recognition する antibody (PAS recognition antibody) している. Test the immunostaining of the これら一连のモノクローナル antibody using いて, コオロギ-optic lobe における.その results, mature PDF to know antibodies, PDF アミド to know antibodies, PAP to know antibodies では, いずれもlamina およびm edulla とcall ばれる presence する timepiece ニューロンの cell body および axon を clear に staining されることが clarified した.さらにinteresting deep いことに, pre-body recognition antibody では, それらのニューロンのcell body のみしか staining されなかった.このことは、PDT former 槆体はchronometer ニューロンのcell body bureau In しており, そこでプロセシングをReceived けることをshows instructing する.また, former 槆body recognition antibody とhis のantibody とのgroup み合わせによる co-immunostaining を行って, former 槆body ペプチドや mature PDF, PAP ペプチドのlocalized site の mutual Relationship べたところ、プロセシング后のMATURITYPDF およびPAPペプチドはともにaxial bureau in する (transport される) ことが初めて明らかとなった.また, time 帯によるeach 々のペプチドの presence amount (immunostaining intensity) には, intentional difference は见られなかったことから、PDFのリズム発appear は、プロセシングdan step でriseきているわけではないことが见唆された. On the one hand, the PDF receptor is the same as the one, and the radioactive PDF is used as an insect. Now, the combined test system has established the conditions of the combined test system.