PDZRN3による核内のパラスペックルを介した新たな心筋分化制御機構の解明

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本研究では、PDZRN3の心筋分化における役割の解明を目的としている。前年度では、iPS細胞から心筋細胞への分化過程におけるPDZRN3の発現挙動を明らかにしてきた。今年度は、iPS心筋細胞の分化過程におけるパラスペックル形成時期を調べ、パラスペックル形成とPDZRN3の発現時期の重なる分化ステージにあるiPS心筋細胞を用いて、パラスペックル構成因子も含めてPDZRN3と相互作用しうるタンパク質の探索を試みた。前年度、複数のパラスペックル構成タンパク質において、抗体が入手可能だったものに関しては、共免疫沈降法によるPDZRN3との結合を解析した。PDZRN3抗体を用いた共沈降では結合を確認できたものの、相手タンパク質に対する抗体では共沈降が確認されず、真に両者が結合するか慎重に見極める必要があると判断した。またパラスペックルをはじめとする液-液相分離体の構築や機能において、それらに関わる様々な制御因子についての新たな情報が出てきている。そのため、PDZRN3の作用標的がパラスペックル形成に関わる周辺制御因子である可能性も見据えた解析が必要であると考えた。そこで狙いを絞った個別解析から、プロテオミクス解析に切り替えて、心筋分化時におけるPDZRN3の相互作用相手を探索し、パラスペックルに直接または間接的関与を持つ因子（あるいは関与不明な未知因子）を一次情報として網羅的に獲得した。PDZRN3はタンパク質相互作用に関わるドメインやモチーフを複数持つため、相互作用相手タンパク質には、それらに対応するような構造要因を持つ可能性が高い。そのような構造情報も加味して、結合可能性の高さをスコア化したリストを作成し、順次詳細な解析を行おうとする段階まで進捗している。