神経系幹細胞の分化制御に関わる分子機構の解析

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本年度において、RNA結合蛋白質Msi1を含む蛋白質複合体の構成要素同定を行うことで、神経幹細胞におけるMsi1による翻訳抑制の分子メカニズムを明らかにしようとした。293T細胞またはP19細胞内においてMsi1蛋白質と結合している蛋白質分子の濃縮・精製をTAP(Tandem Affinity、Purification)法により行い、二種の蛋白質をMALDI-TOF MS法で解析した結果、PolyA Binding Protein(PABP)、IGF2 mRNA Binding Protein(IMP)が同定された。PABPはeIF4G,eIF4E,mRNA 5'-capを介した翻訳開始複合体に含まれることから、Msi1とPABPの結合が翻訳促進時の翻訳複合体形成を不安定化させる可能性を示唆し、未分化性・多分可能を有する神経幹細胞の状態を維持する新規の制御機構である可能性が高いことが明らかとなった。(投稿論文準備中)。現在、上記のmusashi1遺伝子の発現調節の解析を進めている。Celera Discovery systemを用いたcis-element調査の結果、同遺伝子の5'-上流領域やイントロン中にTcf1/Lef1結合配列、Gli結合配列、Stat3結合配列などが存在することが明らかとなった。musashi1遣伝子は種を越えて存在する遺伝子で、マウス、ヒト、ニワトリにおいて、発現細胞の特異性という点で神経系の幹細胞に共通に強く発現している。そこで我々は、ヒト・マウス間で相同性が非常に高い塩基配列領域を複数発見し、それらの領域をEGFPのレポーター遺伝子に連結したコンストラクトを作成した。