甲状腺ホルモン受容体を介した内分泌攪乱物質の生物作用の解析

甲状腺激素受体介导的内分泌干扰物的生物学效应分析

• 批准号: 13027274
• 负责人: 岡部 とし子
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13027274/
• 关键词: 甲状腺ホルモン受容体; 甲状腺ホルモンレスポンスエレメント; レポーターアッセイ; 内分泌攪乱物質; マイクロアレー; シグナル伝達

甲状腺ホルモン受容体(TR)を介した内分泌攪乱物質の生物作用を明らかにする目的で、ヒトTRα1を高発現したヒト子宮癌由来培養細胞であるHeLa細胞株(HeLaTR)を作成し、甲状腺ホルモンレスポンスエレメント(TRE)を有するリポーター(ルシフェラーゼ)遺伝子の発現を指標として内分泌攪乱物質の(抗)甲状腺ホルモン様作用を検討した。HeLaTR細胞にルシフェラーゼ遺伝子を導入しT_3を48時間曝露後、TR複合体の活性化に依存したルシフェラーゼ遺伝子の発現を調べた結果、T_3の添加によりルシフェラーゼ活性が約3.5倍上昇した。種々の化学物質のT_3様作用を調べるためにT_3の替わりに内分泌攪乱物質や重金属化合物などを添加したが、ビスフェノールA、フタル酸ジエチルヘキシル、カドミウム、ヒ素、鉛、水酸化PCB、ダイオキシンいずれの化学物質によってもルシフェラーゼ活性の上昇は観察されなかった。次に、これら化合物をT_3と共に添加し(抗)T_3様作用を検討した結果、カドミウム、ヒ素、鉛、水酸化PCBの添加はT_3によるルシフェラーゼ活性の上昇を阻害したが、ビスフェノールA、フタル酸ジエチルヘキシルはT_3によるルシフェラーゼ活性に影響を及ぼさなかった。さらに内分泌攪乱物質による(抗)甲状腺ホルモン様作用の分子機構を明らかにするために、T_3や内分泌攪乱物質の曝露によって引き起こされる細胞内遺伝子発現の変化をDNAマイクロアレー法により解析した。その結果、HeLaTR細胞にT_3を添加した場合その発現レベルが3倍以上上昇または減少した遺伝子が240種類同定された。またT_3と共に鉛またはフタル酸ジエチルヘキシルを添加した場合の発現レベルが増減した遺伝子についても検討した。現在、これら遺伝子の発現レベルの変化と各化学物質の有する生物作用の関連性を明らかにするために更に詳細な解析を行っている。

To clarify the biological effects of endocrine disruptors mediated by thyroid receptor (TR), the high level of TRα1 was detected in cultured cells derived from uterine cancer, and HeLa cell line (HeLaTR) was prepared. After the introduction of T_3 into HeLaTR cells for 48 hours, the activation of TR complex was regulated. As a result, the activity of TR complex increased by about 3.5 times after the addition of T_3. T_3-mediated action of chemical substances in the species, endocrine disruptors, heavy metal compounds, addition of T_3-mediated action, addition of T_ The effect of T_3 and T_3 on the activity of T_3 was investigated. The results showed that the addition of T_3, lead, lead and hydrochloric acid to PCB inhibited the increase of T_3 activity. The molecular mechanism of endocrine disruptor (anti-thyroid) action was identified by DNA sequencing and analysis of intracellular gene expression in T_3 and endocrine disruptor exposure. As a result, HeLaTR cells increased by more than 3 times and decreased by 240 species when T3 was added. In addition to the above, T_3 and T_3 are also used to increase the number of cases in which the number of cases in which the number of cases is increased. Now, the development and transformation of these chemicals and the relationship between the biological effects of each chemical substance are discussed in detail.