AMPA型グルタミン酸受容体のエンドサイトーシスの分子機構

AMPA型谷氨酸受体内吞作用的分子机制

• 批准号: 13041045
• 负责人: 竹居 孝二
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13041045/
• 关键词: 脳; 神経; AMPA受容体; エンドサイトーシス; グルタミン酸受容体; 膵β細胞

1.膵島β細胞株MIN6のキャラクタライゼイション膵島β細胞にはAMPA受容体が発現していることが見い出されており、本研究ではAMPA受容体のエンドサイトーシスの機構を解明するためにβ細胞を用いることを提案した。まず特異的抗体を用いたWestern blot法により、MIN6におけるAMPA受容体の発現を明らかにした。次にMIN6におけるエンドサイトーシス機能タンパクの発現を調べた。その結果、クラスリン依存性エンドサイトーシスの機能タンパクであるアンフィファイジン、さらにアンフィファイジンのリン酸化酵素CDK5が高発現することがWestern blot法により見い出された。2.エンドサイトーシスのin vitro再構成系の確立AMPA受容体エンドサイトーシスの分子メカニズム解明のためには、エンドサイトーシスによる取り込み小胞の形成をin vitroで再現する実験系の確立が必要であると考えた。In vitroで人工脂質膜(リポソーム)を膜成分として、ATPおよびGTP存在下に細胞質と反応させることにより、大型(直径>1μm)のリポソームから直径100nm以下の小胞が多数形成される実験系を確立した。さらに、形成された小胞の大きさ、数、相対的質量を動的光拡散測定装置を用いて測定することにより、小胞形成の定量化を可能とした。この実験系はAMPA受容体の選択的取り込みを解析するための実験系として応用されうる。

1. The mechanism of AMPA receptor development in β-cell line MIN6 was investigated in this study. The specific antibodies were detected by Western blot, and the AMPA receptor was identified by MIN6. The second MIN6 is the function of the server. The results of the study showed that the activity of CDK5 was significantly higher than that of the control group. 2. The establishment of AMPA receptor molecule structure in vitro reconstruction system is necessary for the establishment of AMPA receptor molecule structure in vitro reconstruction. In vitro, artificial lipid membrane (PLM) was composed of a large number of small cells with diameter less than 100nm in the presence of ATP and GTP, and a large number of small cells with diameter less than 100nm were formed. The size, number, and relative mass of the cells formed in the sample can be quantified by using a light scattering measurement device. This practical system is used to analyze the selection of AMPA recipients.

项目成果

M.Kinuta: "Determination of S-[2-carboxy-1-(1H-imidazol-4-yl)ethyl]glutathione, a novel metabolite of L-histidine, in tissue extracts from sunlight-irradiated rat by capillary electrophoresis"Electrophoresis. 22. 3365-3370 (2001)

M.Kinuta：“通过毛细管电泳测定阳光照射大鼠组织提取物中的 S-[2-羧基-1-(1H-咪唑-4-基)乙基]谷胱甘肽（一种 L-组氨酸的新型代谢物）”

Y.Nemoto: "Characterization of synaptojanin 2β isoforms expressed in brain and tests"J. Biol. Chem.. 276. 41133-41142 (2001)

Y. Nemoto：“大脑中表达的突触蛋白 2β 异构体的表征和测试”J. Biol. 276. 41133-41142 (2001)

K.Farsad: "Generation of high curvature membranes mediated by direct endophilin-bilayer interactions"J. Cell Biol.. 155. 193-200 (2001)

K.Farsad：“由直接内亲蛋白双层相互作用介导的高曲率膜的生成”J。

M.Kinuta: "Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate stimulates vesicle formation from liposomes by brain cytosol"Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 99. 2842-2847 (2002)

M.Kinuta：“磷脂酰肌醇 4,5-二磷酸通过脑细胞溶胶刺激脂质体形成囊泡”Proc.Natl.Acad.Sci.USA。

K.Takei: "Clathrin-mediated endocytosis : membrane factors pull the trigger"Trends in Cell Biol.. 11. 385-391 (2001)

K.Takei：“网格蛋白介导的内吞作用：膜因子拉动扳机”细胞生物学趋势.. 11. 385-391 (2001)