エンドサイト-シス小胞形成のリアルタイム観察

实时观察内吞顺式囊泡形成

• 批准号: 15657028
• 负责人: 竹居 孝二
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15657028/
• 关键词: エンドサイトーシス; 小胞輸送; 無細胞系; ライブイメージング; リポソーム; ダイナミン; アンフィファシジン; ライブイメージグ

ファゴサイトーシスの分子機構解明のために、セルトリ細胞を用いてファゴサイトーシスのリアルタイム観察を行った。まず、セルトリ細胞株SerW3にフォスファチジルセリン(PS)を認識する受容体(SR-B1)が発現していることをウエスタンブロットにより確認し、細胞膜における局在のパターンを蛍光免疫染色により明らかにした。次に、SerW3細胞によるPS含有大型リポゾーム取込みを経時的、定量的に調べることにより、セルトリ細胞のファゴサイトーシスが、SR-B1を介してPS依存性に起こることを明らかにした。SerW3細胞に、PS含有リポゾームあるいはPSで被覆したスチレンビーズを貪食させ、その様子を超高速共焦点レーザー顕微鏡下でリアルタイム観察したところ、ファゴサイトーシスにおけるpseudo pod形成に先立って糸状突起やラッフルの形成など、F-アクチンの再編成による細胞膜の形態変化が著明に認められた。PS刺激からアクチン重合、ラッフル形成にいたる経路には、フォスファチジルイノシトール3リン酸キナーゼ、Rac、cdc42が関与することが阻害剤を用いた実験により示された。GFP-アンフィファイジン1を発現させたSerW3細胞をライブイメージングにより観察すると、ラッフル形成に伴ってアンフィファイジン1がラッフルに集積する様子が認められた。SerW3細胞のアンフィファイジン1をRNAiによりノックダウンするとラッフル形成が抑制されたことから、アンフィファイジン1がファゴサイトーシス初期におけるアクチンフィラメントの再編成に関与することが示唆された。

The molecular structure of the protein is analyzed and analyzed. The receptor (SR-B1) of SerW3 cell line was identified by photoimmunostaining. SerW3 cells contain a large number of molecules, such as RNA, RNA and RNA. SerW3 cells, PS containing PS, PS coating, gluttony, S-particles, ultra-high-speed confocal focus, microscopic observation, pseudo-pod formation, initial protrusion formation, F-protein recombination, morphological changes of cell membrane, etc. PS stimulation, such as coincidence, formation, etc., in the circuit, Rac, cdc42, etc., in the circuit, Rac, cdc42, etc., in the circuit, Rac, cdc42, etc. GFP-1 is generated by SerW3 cells, and the SerW3 cells are generated by SerW3 cells. SerW3 cells are divided into two groups: the first group and the second group. The second group is divided into three groups: the first group and the third group.

项目成果

Dynamin and endocytosis.

• DOI: 10.1016/s0955-0674(02)00347-2
• 发表时间: 2002-08
• 期刊: Current opinion in cell biology
• 影响因子: 7.5
• 作者: Sanja Sever

Stimulation of dynamin GTPase activity by amphiphysin.

• DOI: 10.1016/s0076-6879(05)04046-2
• 发表时间: 2005
• 期刊: Methods in enzymology
• 作者: Y. Yoshida;K. Takei

ダイナミンとエンドサイトーシス

动力和内吞作用

• 发表时间: 2004
• 期刊: 蛋白質 核酸 酵素 増刊『細胞における蛋白質の一生』 49
• 作者: Chen ES;Yanagida M;Takahashi K.;竹居孝二
• 通讯作者: 竹居孝二

Immunohistochemical localization of Klotho protein in brain, kidney, and reproductive organs of mice

• DOI: 10.1247/csf.29.91
• 发表时间: 2004-12-01
• 期刊: CELL STRUCTURE AND FUNCTION
• 影响因子: 1.5
• 作者: Li, SA;Watanabe, M;Takei, K
• 通讯作者: Takei, K

A human beta-cell line for transplantation therapy to control type 1 diabetes.

• 发表时间: 2005
• 期刊: Nature biotechnology
• 影响因子: 46.9
• 作者: M. Narushima;N. Kobayashi;T. Okitsu;Yoshihito Tanaka;Shun‐Ai Li;Yong Chen;A. Miki;Kimiaki Tanaka-Kimiaki-Tan