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EBウイルス癌遺伝子産物EBNAとLMP1の協調作用による細胞増殖の分子機構

EB病毒癌基因产物EBNA与LMP1协同作用细胞增殖的分子机制

基本信息

批准号：
13214102
负责人：
原田志津子
金额：
$ 1.98万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13214102/
关键词：
EBウイルス癌ウイルス細胞増殖核蛋白 EBNA 転写活性化 LMP1 蛋白蛋白相互作用

项目摘要

ヒトの癌ウイルスであるEpstein-Barr(EB)ウイルスはヒト初代B細胞をトランスフォームし試験管内発がんを起こす。これには感染初期に同時発現される核蛋白EBNA-2とEBNA-LPが不可欠である。EBNA-2は転写活性化因子として作用し、EBNA-LPはEBNA-2の転写活性化を促進する補因子機能を持つ(Harada_&_Kieff, J. Virol., 1997)。本研究では、EBNA-LP補因子機能の作用メカニズム解明のために、EBNA-LPとEBNA-2との相互作用を検討し、さらにEBNA-LPと結合・会合する細胞性蛋白の検索を免疫沈降法および酵母のTwoハイブリッド法で試みた。その結果、免疫沈降法によってEBNA-LPと特異的に相互作用する蛋白をアミノ酸分析で同定した。Hsp70(72/73)との結合が確認され、さらに結合蛋白としてDNA-PK、HA95,Hsp27,proryl 4-hydroxylase α-1,α-tubulin,β-tubulinを同定した。また、酵母中で相互作用する細胞性蛋白遺伝子を検索し塩基配列を決定・同定した遺伝子の一つは、あるりん酸化酵素基質と結合してミトコンドリアに局在する蛋白HAX1であった。核蛋白EBNA-2の機能解析を目的とした免疫沈降およびGST融合蛋白実験などの蛋白蛋白相互作用解析の結果、EBNA-2のN末端領域の多量体形成能を発見した。一方、ウイルス発がん遺伝子産物LMP1はTNF受容体シグナル伝達系を模して機能するが、二つの核蛋白EBNA-2およびEBNA-LPが膜蛋白LMP1発現量調節の制御を司る。本研究でLMP1蛋白の上皮系細胞形質転換活性の検討を行うと共に、二つの核蛋白の機能制御が重要であると考え、核蛋白の機能と相互作用を解析した。2つの核蛋白の直接結合は証明されなかったが、本研究ではEBNA-LPの機能に関するドミナントネガティブ変異体を見い出した。この変異株はEBNA-2によるLMP1遺伝子の転写活性化を抑える効果を示したことから、これを利用した腫瘍細胞の増殖抑制を含む癌治療の可能性が示唆された。

Epstein-Barr(EB) is the first generation of B cells to develop in vitro. The nuclear protein EBNA-2 and EBNA-LP were detected simultaneously in the early stage of infection. EBNA-2 plays a role in the activation of EBNA-2 and EBNA-LP plays a role in the activation of EBNA-2 (Harada_&_Kieff, J. Virol., 1997)。In this study, we investigated the interaction between EBNA-LP and EBNA-2 and the function of EBNA-LP complement factors. The results of the immunoprecipitation assay were similar to those of the EBNA-LP specific interaction assay. The binding of Hsp70 (72/73) to DNA-PK, HA95, Hsp27,proryl 4-hydroxylase α-1,α-tubulin,β-tubulin was confirmed. The cellular protein gene that interacts with yeast determines the nucleotide alignment of the protein and the enzyme matrix binding of the protein HAX1. Functional analysis of nuclear protein EBNA-2: results of protein-protein interaction analysis of immunosedimentation and GST fusion protein, and discovery of multi-volume formation in the N-terminal domain of EBNA-2 One of them is LMP1, which is a membrane protein, and the other is EBNA-2 and EBNA-LP, which regulate the production of LMP1. In this study, we investigated the role of LMP1 protein in cytokinesis and its interaction with nuclear protein. 2. The direct binding of nuclear proteins was demonstrated. In this study, the function of EBNA-LP was investigated. The inhibition of gene activation of EBNA-2 and LMP-1 genes in these plants has been shown to inhibit proliferation of tumor cells and to demonstrate the possibility of cancer therapy.