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GM-CSFによる遺伝子再構成に関わる遺伝子群のサブトラクション法による同定

扣除法鉴定参与 GM-CSF 基因重排的基因组

基本信息

批准号：
13218017
负责人：
佐藤宏
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13218017/
关键词：
NKT細胞分化遺伝子再構成サブトラクション・クローニング

项目摘要

従来、リンパ球系列の細胞としては、T細胞、B細胞、NK細胞の3種類の存在が知られていたが、近年になって新たに第4のリンパ球系列の細胞群としてNKT細胞が同定された。この細胞は、自己免疫疾患の発症抑制や、強い抗腫瘍作用を有することから注目を集めているが、その分化経路・機序に関しては不明な点が多い。我々は、最近、NKT細胞の前駆細胞を同定し、この細胞においてGM-CSFレセプターを介したシグナルによってT細胞レセプターα鎖遺伝子再構成が高頻度に誘導されることを明らかにした。本申請課題では、このような遺伝子再構成、分化に関連する遺伝子群を単離し、NKT細胞分化機序の一端を明らかにすることを目的とした。NKT前駆細胞においてはGM-CSFレセプターを介したシグナルによってT細胞レセプターα鎖遺伝子再構成が高頻度に誘導され、成熟した細胞に分化する。この機構を明らかにすることを目的として、分化誘導に伴って発現レベルの変化する関連遺伝子の単離を行った。NKT前駆細胞をGM-CSFにより分化を誘導し(活性化前駆細胞)、分化誘導前NKT前駆細胞との間でサブトラクション・クローニング法を行った。また、活性化前駆細胞に特異的と考えられた数百個のクローンに関してさらにvirtual Northern法ならびにRT-PCR法によって特異性を再確認し、確認されたすべてのクローンをシークエンスした。その結果、この分化誘導に伴い24種類の既知遺伝子と、6種の新規遺伝子が分化に伴って発現レベルが上昇することを確認した。新規遺伝子に関しては、得られた配列情報に基づきRACE法を行い全長mRNA配列の決定を行った。今後主にNKT細胞の分化、機能等の観点から機能の解析を続行する計画である。そして、同定した遺伝子の機能を解析するために、ノックアウトマウスを作成中である。

In recent years, the existence of three types of T cells, B cells and NK cells has been known, and in recent years, the fourth type of NKT cells has been identified. These cells have the function of inhibiting the development of immune diseases and strengthening the anti-tumor effect. Recently, NKT cells have been identified as precursor cells, and these cells have been identified as GM-CSF cells. The subject of the present application is to clarify one end of the NKT cell differentiation mechanism by separating the gene groups from each other in order to reconstruct and differentiate the gene. NKT precursor cells are induced to differentiate into mature cells with high frequency by GM-CSF gene recombination. The mechanism of this kind of organization is to make clear the purpose, differentiation and development of the relationship between the two parties. NKT precursor cells are induced to differentiate by GM-CSF (activated precursor cells), and NKT precursor cells are induced to differentiate by GM-CSF. Before activation, hundreds of cells were tested for specificity by virtual Northern and RT-PCR. The results showed that 24 kinds of known genes and 6 kinds of new genes were induced by differentiation, and the results were confirmed. The new method is used to determine the alignment of full-length mRNA. In the future, we will focus on the differentiation and function of NKT cells and analyze their functions. The function of the same gene is analyzed.