GM-CSFによる遺伝子再構成に関わる遺伝子群のサブトラクション法による同定

扣除法鉴定参与 GM-CSF 基因重排的基因组

• 批准号: 12217023
• 负责人: 佐藤 宏
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12217023/
• 关键词: NKT細胞; サブトラクションクローニング; GM-CSF; 遺伝子再構成

従来、リンパ球系列の細胞としては、T細胞、B細胞、NK細胞の3種類の存在が知られていたが、近年になって新たに第4のリンパ球系列の細胞群としてNKT細胞が同定された。この細胞は、自己免疫疾患の発症抑制や、強い抗腫瘍作用を有することから注目を集めているが、その分化経路・機序に関しては不明な点が多い。我々は、最近、NKT細胞の前駆細胞を同定し、この細胞においてGM-CSFレセプターを介したシグナルによってT細胞レセプターalpha鎖遺伝子再構成が高頻度に誘導されることを明らかにした。本研究の目的は、このような遺伝子再構成、分化に関連する遺伝子群を単離し、NKT細胞分化機序の一端を明らかにすることである。セルソーターを用いて、分取したNKT前駆細胞をGM-CSF存在下に培養を行い、分化を誘導した。成熟NKT細胞に発現するT細胞リセプター遺伝子の再構成および再構成に伴って生成されるシグナル配列をPCR法にて同定し、in vitroでの遺伝子再構成を確認した。次いで、分化誘導前のNKT前駆細胞のcDNAとの間でサブトラクション・クローニングを行った。活性化前駆細胞に特異的と考えられた数百個のクローン関してさらにvirtual Northern法ならびにRT-PCR法によって特異性を確認し、確認されたすべてのクローンをシークエンスした。この分化誘導に伴い24種類の既知遺伝子と、6種の新規遺伝子が分化に伴って発現レベルが上昇することを確認した。新規遺伝子に関しては、得られた配列情報に基づきRACE法を行い全長mRNA配列の決定を行っている。今後主にNKT細胞の分化、機能等の観点から機能の解析を続行する計画である。

従, リ ン パ ball series の cells と し て は, T cells, B cells, NK cells の 3 kinds の exist が ら れ て い た が, recent に な っ て new た に 4 の リ ン パ ball series の cells と し て が NKT cells might be さ れ た. の こ は の cells, immune disease suppression 発 disease や, strong い swollen sores role を have す る こ と か ら attention を set め て い る が, そ differentiation 経 の way, machine sequence に masato し て は unknown な が い more. I 々 は, recently, NKT cells before の 駆 を with し, こ の cells に お い て gm-csf レ セ プ タ ー を interface し た シ グ ナ ル に よ っ て t-cell レ セ プ タ ー alpha lock heritage 伝 son constitute が high frequency induced さ に れ る こ と を Ming ら か に し た. は の purpose, this study こ の よ う な heritage 伝 reconstitution, differentiation に masato even す る heritage 伝 subgroup を 単 from し, NKT cells differentiation machine sequence の end を Ming ら か に す る こ と で あ る. セ ル ソ ー タ ー を with い て, divide し た 駆 before NKT cells を に cultivation in the presence of gm-csf を line い, induced differentiation を し た. NKT cells mature に 発 now す る t-cell リ セ プ タ ー posthumous son 伝 の reconstitution お よ び constitute に again with っ て generated さ れ る シ グ ナ ル go を PCR method に て with し, the in vitro で の heritage 伝 son to constitute を confirmation し た. Before time い で, induced differentiation の の 駆 before NKT cells cDNA と の between で サ ブ ト ラ ク シ ョ ン · ク ロ ー ニ ン グ を line っ た. Activeness に specific と 駆 cells before exam え ら れ た hundreds of の ク ロ ー ン masato し て さ ら に virtual method of Northern な ら び に rt-pcr method に よ っ て specificity を confirmation し, さ れ た す べ て の ク ロ ー ン を シ ー ク エ ン ス し た. こ の induction に with 24 kinds の い already know but 伝 と, six の に with new rules but 伝 son が differentiation っ て 発 now レ ベ ル が rise す る こ と を confirm し た. New rules but 伝 son に masato し て は, ら れ た match column intelligence に base づ き RACE method を line length い mRNA with column の decided を っ て い る. In the future, the main にNKT cell <s:1> differentiation, function and other <s:1> 観 points を続 ら function <e:1> analysis を続 implementation する plan である.

项目成果

Sato,H.: "Induction of differentiation of pre-NKT cells to mature Vα14 NKT cells b granulocyte/macrophage colony-stimulating factor."Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 96. 7439-7444 (1999)

Sato, H.：“粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子诱导前 NKT 细胞分化为成熟 Vα14 NKT 细胞。”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 96. 7439-7444 (1999)。

Harada,M.: "Regulation of Vα14 NKT cell-mediated cytotoxicity by a glycolipid ligand/CD1d complex on target cells."J.Exp.Med.. (submitted).

Harada, M.：“通过靶细胞上的糖脂配体/CD1d 复合物调节 Vα14 NKT 细胞介导的细胞毒性。”J.Exp.Med..（已提交）。