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C型肝炎ウイルスワクチン開発のためのCD81の構造生物学的研究

CD81用于丙型肝炎病毒疫苗开发的结构生物学研究

基本信息

批准号：
13226056
负责人：
北所健悟
金额：
--
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

C型肝炎ウイルスレセプターであるCD81タンパク質のメジャー細胞外ドメインであるLELタンパク質(CD81-LEL)とペプチド性の阻害剤を共結晶させた外形並びに結晶学的データが全く異なる新規な結晶についてSPring-8において2.6Å分解能のデータ測定を行い、この回折強度データと既に構造解析を整えたNativeの立体構造を基に、分子置換法の手法を用いて立体構造を決定した。その結果、阻害剤部分の電子密度については観測することはできなかったが、新たな結晶系においては、その立体講造が大きく変化していることが判った。その部位は、とりわけHCVが結合すると考えられるheadサブドメインであり、HCVの結合に重要であるPhe186残基の周辺が大きく変化していることが判った。その結果、2つの結晶系におけるCD81-LELの立体構造決定により、4つの可能なコンフォーメーションを得ることができた。2量体の形成に関与するStalkサブドメインは、立体構造が保持されていることから生体内においてもCD81が2量体として存在することを示唆している。一方、HCVの結合に関与するHeadサブドメインは、立体構造の柔軟さが観測された。HCV-E2蛋白質の結合に必須であるPhe186残基並びにその周辺の疎水性アミノ酸からなる疎水性クラスターは溶媒側に突出して存在し、いずれの構造においても、結晶内で他の対称な分子とパッキングしていた。従って、この領域がHCVとの相互作用に関与する部位であると考察できる。また、CD81-LELタンパク質の発現精製を行い、もう一つのCD81の細胞外ドメインであるSELタンパク質(Small Extracellular Loop)との複合体の共結晶化実験を試みた。SELタンパク質はLELと共存することにより、HCV結合の活性を促進することがわかっている。このことより、CD81のLEL/SELの全細胞外ドメインの立体構造決定は、HCVワクチン開発を考える上で重要であると考えられる。共結晶化スクリーニングの結果、新たな結晶形を有するLEL/SEL複合体タンパク質結晶を得る事ができた。Spring-8にてX線回折データ測定を行ったところ、2.0A分解能のデータを収集することができ、空間群がC2に属する新規な結晶系に属することがわかった。

Hepatitis C virus infection CD81 virus infection extracellular virus infection LEL virus infection (CD81-LEL), a new method for the determination of crystal morphology and crystallographic properties, SPring-8, 2.6, decomposition energy, refractive strength, structural analysis, adjustment, Native three-dimensional structure, molecular replacement method, and determination of three-dimensional structure. As a result, the electron density of the barrier component is measured, and the new crystal system is determined. The position of HCV binding is important for HCV binding. The circumference of Phe186 residue is important for HCV binding. 2. The crystal system of CD81-LEL is determined by the three-dimensional structure of CD81-LEL. 4. The crystal system of CD81-LEL is determined by the three-dimensional structure of CD81-LEL. The formation of 2-dimensional structure is related to the existence of CD81 - 2-dimensional structure. One side, HCV binding and the other side, three-dimensional structure and soft test. The binding of HCV-E2 protein requires the presence of Phe186 residues and the presence of other molecules in the structure and crystallization of the molecule. The interaction between HCV and HCV was investigated in different areas. In the process of purification of CD81-LEL complex, the co-crystallization of CD81-LEL complex was studied. SELF-binding activity is promoted by the presence of LEL and blue shift in SELF-binding. The three-dimensional structure of CD81 LEL/SEL is important for the development of HCV. The results of co-crystallization, new crystal forms, and the results of co-crystallization of LEL/SEL complexes Spring-8 X-ray retroflex measurement of 2.0A resolution energy collection, space group C2, new crystal system