ヒトパピローマウイルスの表皮基底層持続感染と宿主細胞分化に伴う増殖機構の研究

人乳头瘤病毒表皮基底层持续感染及与宿主细胞分化相关的增殖机制研究

• 批准号: 13226131
• 负责人: 神田 忠仁
• 金额: --
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13226131/
• 关键词: ウイルス; 持続感染; 発生・分化

子宮頚癌の原因となるヒトパピローマウイルス(HPV)は皮膚や粘膜の微小な傷から表皮内に侵入し、表皮基底層の細胞にエピゾームの状態で持続感染する。宿主細胞が最終分化を始めるとHPVは増殖する。このようなHPV持続感染の成立・維持と増殖の分子機構の解明をめざしている。HPVゲノムには2つのプロモーター、p97とp670、があり、p670からはゲノムの複製に必要な蛋白質E1とキャプシドの構成蛋白質、L1及びL2のmRNAが転写される。通常の培養細胞ではp670は不活性で、ゲノムの複製もキャプシドの形成も起こらない。しかし、培養細胞に表皮基底層細胞の分化を誘導する転写因子、hSkn-1a、がp670を活性化することを見いだした。hSkn-1aがp670の近傍2カ所に塩基配列特異的に結合すること、この結合部位にはYY1も結合することがわかった。また、結合配列に置換変異を導入してYY1と結合できない構造にするとp670からの転写が起こった。gelshift assayでは結合配列を持つ合成DNA断片とYY1を予め結合させた後にhSkn-1aを加えると、YY1とhSkn-1aの置換が起こった。これらの成績は、hSkn-1aがp670の近傍にYY1と置き換わりながら結合し、YY1による転写の抑制を解除することを強く示唆している。hSkn-1aを培養細胞で発現させ続けることはできないので、hSkn-1aの発現をon/offできるHeLa細胞株を作った。hSkn-1aの発現を誘導すると数日で分化のマーカーであるケラチン10が発現し、扁平な非増殖性の細胞が出現した。hSkn-1a発現下では、p97からの転写が著しく増強され、p670からの転写も起こった。今後、この細胞株を利用してHPVp670活性化の詳細な分子機構を調べる。

The cause of uterine cancer is HPV (HPV), which is caused by small lesions in the skin and mucosa, invasion of the epidermis, and persistent infection of the cells in the basal layer of the epidermis. The host cell is finally differentiated and HPV is propagated. The molecular mechanism of HPV infection is established, maintained and propagated. HPV DNA is encoded by p2, p97, p670, p670, protein E1, protein L1 and mRNA L2, which are essential for HPV replication. Usually, cultured cells are inactivated by p670, and the replication process is initiated. In addition, the differentiation of epidermal basal layer cells in cultured cells is induced by the activation of transcription factors, hSkn-1a and p670. hSkn-1a binds specifically to p670 at the base alignment site and at the binding site. In addition, the combination of the array of substitution is different from the introduction of YY1 and the combination of the structure of p670. The gelshift assay is a combination of synthetic DNA fragments and YY1. After the combination, hSkn-1a is added and YY1 and hSkn-1a are replaced. The results of this study are as follows: 1. HSkn-1a is close to p670, YY1 is close to p670. hSkn-1a cells develop on/off HeLa cell lines The expression of hSkn-1a was induced in a few days, and the differentiation of hSkn-1a was induced in a few days. The expression of hSkn-1a was induced in a few days. hSkn-1a is now open, p97 is open, p670 is open. In the future, the cell line will be used to modulate the molecular mechanism of HPVp670 activation.

项目成果

Kukimoto, Kanda, T.: "Displacement of YY1 by Differentiation Specific Transcription Factor hSkn-1a Activates P670 Promoter of Human Papillomavirus Type 16"Journal of Virology. 75. 9302-9311 (2001)

Kukimoto, Kanda, T.：“分化特异性转录因子 hSkn-1a 取代 YY1 激活人乳头瘤病毒 16 型 P670 启动子”病毒学杂志。