新規Zn finger転写調節因子EOSの神経発生における役割

新型锌指转录调节因子 EOS 在神经发生中的作用

• 批准号: 13670021
• 负责人: 横屋 幸彦
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13670021/
• 关键词: Zn-finger 転写因子; zebrafish; Ikaros family; zebrafish-Eos; 体軸形成; 初期神経形成

通常の発現解析に用いられるnorthern解析とin situ hybridization法で解析した。ゼブラフィッシュ発生の各段階でのゼブラフィッシュEos(z-Eos) mRNAの発現を,魚類を使っての研究の利点である発生の極初期の胞胚期から初期神経系形成期までを重点的にWhole mount in situ hybridization及び通常の切片でのin situ hybridization法で解析した。その結果、さきに、マウス胚において認められた神経胚より初期の段階、嚢胚期にz-Eosの発現が認められた。受精後24時間を過ぎた頃から、発現部位が頭部中枢神経系に限定された。in situ hybridization法での結果をnorthern解析により確認を試みたが、今のところ確認されていない。northern解析より感度よく発現を感知できるRT-PCRによる解析を採用して現在発現解析を試みている。ゼブラフィッシュ初期胚においてz-Eos遺伝子の強制発現実験を試みる。まずover expression実験として、zEosのcoding strand RNAを2細胞期の受精卵の片側に注入した後somitogenesisの時期までの発生を観察した。同時に、z-Eos cDNAのDNA結合領域を欠いた変異遺伝子を作成しDominant negative効果の実験を試みた。その結果、z-Eosの過剰発現は高頻度で体軸形成と中枢神経系の形態形成異常誘引した。この事実は体軸形成、初期神経系の形成に係わる遺伝子郡goosecoid, no tail, Otx2, Eng3, Pax6, krx-20等のマーカー遺伝子の発現がz-Eosの過剰発現によって乱されるというover expressionでの結果とも一致した。

Usually, the northern analysis and in situ hybridization method are used for the analysis. The expression of Eos(z-Eos) mRNA at all stages of fish development is an important point in fish research. The analysis of Whole mount in situ hybridization and in situ hybridization methods is also important. The results of the study are as follows: 24 hours after fertilization, the central nervous system of the head is limited. The results of the in situ hybridization method are analyzed in the northern part and confirmed in the present part. northern analysis, detection, detection, RT-PCR analysis, detection, detection, The stress development of the early stage embryo of Eos gene was studied. The development of somitogenesis after the injection of zEos coding strand RNA at the 2-cell stage was observed. At the same time, the Z-Eos cDNA DNA binding domain is incomplete, and the construction of dominant-negative effect is attempted. As a result, the occurrence of z-Eos was induced by high frequency of somatic axis formation and abnormal morphology of central nervous system. The development of this phenomenon is related to the formation of somatic axis and the formation of early nervous system, such as goosecoid, no tail, Otx2, Eng3, Krx-20, etc.