水不溶性グルカン分解酵素の遺伝子クローニングとその解析

水不溶性葡聚糖降解酶基因克隆及分析

• 批准号: 13771081
• 负责人: 森崎 弘史
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771081/
• 关键词: Prevotella oralis; ムタナーゼ; デキストラナーゼ

昨年度の本研究の結果から、Prevotella oralisのムタナーゼの活性を試験管内で検出することが困難であることが判明している。また、P.oralisによる寒天培地中でのムタン分解はムタナーゼ単独によるものではなく、デキストラナーゼなど他のグルカナーゼとの共同作用による可能性も考えられる。そこで本年度は、P.oralisのデキストラナーゼの遺伝子クローニングを行うことを目的とした。デキストラナーゼについてはStreptococcus属で解析が進んでおり、同じ機能を持つ酵素であれば異なる種でも類似した構造を持つ可能性が考えられることから、本研究ではまずStreptococcus mutansのデキストラナーゼの解析を進めることとした。Streptococcus属のデキストラナーゼは菌種間でよく保存された保存領域とその両端の可変領域からなることが明らかとなっている。これまでのS.mutansのデキストラナーゼの解析結果から保存領域内に活性中心が存在することがわかっている。しかし、その活性中心を変異させた部位特異的変異体は基質に対する結合能を保持しており、活性中心以外に基質結合に関与する領域が存在すると考えられた。そこで、S.mutansのデキストラナーゼのN末端およびC末端欠失変異体を作成し、デキストラナーゼ活性とデキストラン結合能を解析した。その結果、保存領域のC末端側およそ120アミノ酸がデキストラン結合に必須であることが明らかとなった。これらの結果をもとに保存領域中で特に相同性の高いアミノ酸配列を選出しdegenerate primerを作成してdegenerate PCR法によるP.oralisデキストラナーゼの遺伝子クローニングを試みた。しかし現在までのところ目的とする遺伝子断片は得られておらず、条件検討が必要と考えられる。

According to the results of this study last year, the results of the Prevotella oralis study showed that there were significant differences in the results of this study. In the cold weather, there was a lot of trouble in the earth, and there was a lot of trouble in the cold weather, so that in the cold weather, there was a lot of trouble in the cold weather, and in the cold weather, in the cold weather. In the current year, P.oralis has been asked to pay attention to the purpose of the current year. In this study, we need to know that the performance of Streptococcus is different, and that the same machine can use enzymes to test the possibility of identification. In this study, we need to analyze the performance of Streptococcus mutans in this study. Streptococcus can be used in the field of storage and storage of bacteria, bacteria and bacteria in the field. The results show that there is an active center in the preservation field because there is a significant difference between the active center and the S.mutans. The combination of the specific parts of the active center and the active center can be used to maintain the activity, and the combination of the base outside the active center and the field of the active center can be used in the field. The results show that the N-terminal and the C-terminal are missing from the N-terminal and the C-terminal. The results show that the N-terminal, the C-terminal, the C-terminal, the N-terminal, the C-terminal, the C-terminal, the N-terminal, the C-terminal, the C-terminal, the N-terminal, the C-terminal, the C-terminal, the N-terminal, the C-terminal, To verify the results, save the domain C-terminal system 120%. You must make sure that you do not know if you want to combine the results with the field. The results show that the data in the field are similar to each other. In the field, the degenerate primer is used to make the degenerate PCR method known as the degenerate PCR method. In this way, you can use the P.oralis method to determine the accuracy of the system. Now that you know what's going on, you need to know that the fragments are not available, and that the conditions are necessary.

项目成果

森崎 弘史: "Analysis of a dextran-binding domain of the dextranase of streptococcus mutans"Letters in Applied Microbiology. 35. 223-227 (2002)

Hiroshi Morisaki：“变形链球菌葡聚糖酶的葡聚糖结合域的分析”应用微生物学快报 35. 223-227 (2002)。