S.sobrinus gtf遺伝子発現株によるバイオフィルム形成機序の解析

S. sobrinus gtf基因表达菌株生物膜形成机制分析

• 批准号: 13771082
• 负责人: 桑原 紀子
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771082/
• 关键词: バイオフィルム; Streptococcus sobrinus; グルコシルトランスフェラーゼ; 形質転換株; S. anginosus形質転換株; gtf遺伝子; S. sobrinus

ヒト齲蝕は齲蝕原性菌であるStreptococcus mutansおよびStreptococcus sobrinusの2菌種が産生するグルコシルトランスフェラーゼ(GTF)の作用により歯面上に齲蝕誘発性バイオフィルムを形成することに始まる。現在S.sobrinusは4種類のGTFを産生することが知られている。本研究はS.sobrinusにおけるバイオフィルム形成のメカニズムを、B13N株を由来とした4種類のgtf遺伝子を非齲蝕原性菌Streptococcus anginosusへ導入した形質転換株を作製し、これらを用いて解明することを最終目的としている。本申請ではまず4種類のgtf遺伝子を取得することを目指し、平成13年度はgtfT遺伝子産物を単独発現する形質転換株を作製することに成功し報告した。平成14年度は形質転換株の染色体DNA上におけるgtfT遺伝子構造の確認およびガラス管壁への人工プラーク形成試験を行った。遺伝子構造はPCR法を用いて確認した。まず形質転換株より染色体DNAを精製した。プライマーはgtfT遺伝子上流に位置するp15A領域およびOMZ176株のgtfT遺伝子の塩基配列を参考に設計した。PCRで増幅されたDNA断片をアガロースゲル電気泳動に供したところ、予想された約6.2kbのDNA断片が検出された。さらにこの断片を数種の制限酵素で切断し再度電気泳動を行った結果、形質転換株上のgtfT遺伝子の構造は親株のそれと同じであることが確認された。次に、この形質転換株をガラス管壁に対する人工プラーク形成能試験に供した。0.5%のショ糖を含むTHB培地に接種し、37℃にて30゜の傾斜培養を行った。10秒間のボルテックス処理後ガラス管壁に固着した菌体を超音波処理し、濁度測定(550nm)した結果、本形質転換株単独ではガラス壁面に固着する能力はないことが確認された。現在、gtfS遺伝子を単独発現する形質転換株の作製を試みている。

ヒ ト decay は decay former sex bacteria で あ る Streptococcus mutans お よ び Streptococcus sobrinus の 2 strains が produce す る グ ル コ シ ル ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ (GTF) の role に よ り 歯 surface に decay 発 sex lure バ イ オ フ ィ ル ム を form す る こ と に beginning ま る. Now S.sobrinus する 4 kinds <s:1> GTFを produce する とが とが known られて る る る. This study は S.s obrinus に お け る バ イ オ フ ィ ル ム form の メ カ ニ ズ ム を, B13N を origin と し た 4 kinds の GTF heritage 伝 son を non decay the original bacterium Streptococcus Anginosus へ import し た form quality planning in plant し the を cropping, こ れ ら を with い て interpret す る こ と を final purpose と し て い る. This application で は ま ず 4 kinds の GTF heritage 伝 child obtain を す る こ と を refers し, pp.47-53 13 year は gtfT heritage 伝 zi chan content を 単 発 alone now す る form quality planning in plant を cropping す る こ と に し report success し た. Pp.47-53 14 year は form quality planning in plant の chromosome DNA に お け る gtfT heritage 伝 sub structure の confirm お よ び ガ ラ ス wall へ の artificial プ ラ ー ク formation test line を っ た. The 伝 substructure is confirmed by を て PCR method を for <s:1> た. Youdaoplaceholder0 morphological and cytoplasmic 転 strain よ <s:1> chromosomal DNAを refinement <s:1> た. プ ラ イ マ ー は gtfT heritage 伝 upper-class に location す る p15A field お よ び OMZ176 strains の gtfT posthumous son 伝 の salt base with column を reference に design し た. PCR で rights of さ れ た DNA fragment を ア ガ ロ ー ス ゲ ル electric 気 swimming に for し た と こ ろ, to want to さ れ た about 6.2 KB の DNA fragment が 検 out さ れ た. さ ら に こ の fragment を で several limitations の enzyme cut し again electric line 気 swimming を っ た results, character planning in plants の gtfT posthumous son 伝 の tectonic は parent strain の そ れ と with じ で あ る こ と が confirm さ れ た. The subsequent に and <s:1> <s:1> shape and mass 転 replacement of the をガラス pipe wall に can experimentally support the する artificial プラ <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> た for the formation of energy. 0.5% <s:1> ショ sugar を containing むTHB inoculated に, 37℃にて30゜ <s:1> inclined culture を rows った. 10 seconds between の ボ ル テ ッ ク ス 処 reason after ガ ラ ス wall に fixation し た bacteria を し ultrasound 処 and turbidity measurement (550 nm) し た results, this form of quality planning in plant 単 alone で は ガ ラ ス wall に fixation す る ability は な い こ と が confirm さ れ た. Now, the 伝 offspring of gtfS have independently developed する morphological quality 転 transplanting techniques for making を experiments みて る る.