Streptococcus sobrinusのスクロース代謝酵素遺伝子の解析

远缘链球菌蔗糖代谢酶基因分析

• 批准号: 08771973
• 负责人: 磯部 豊
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771973/
• 关键词: ストレプトコッカス・ソブリヌス; グルカン; gtf遺伝子

目的:Streptococcus sobrinusf,菌体の内外でのスクロース代謝により齲蝕を発生させる。我々は,S.sobrinus OMZ176株のgtf遺伝子上流の塩基配列決定を行い,隣接するopen reading frame の塩基配列がStreptococcus downei MFe28株のgtfS遺伝子の塩基配列と非常によく似ているため,2つのgtf遺伝子が隣接し,オペロン形成をしている可能性を示した^<1)>。本研究ではgtfをはじめとするスクロース代謝酵素の遺伝子群の相互位置関係を深るため,スクロース分解活性を示す酵素の遺伝子クローニングを試みた。方法:S. sobrinus SLl株(ATCC33478,Type strain の染色体DNA をPstIで切断後,プラスミドpUC19を用いて遺伝子ライブラリーを作成した。GTF活性の測定は29mM[^<14>C]sucroseを用い,生成した[^<14>C]glucanをグラスファイバーフィルター上に集めて洗浄後,ラジオアイソトープ法で行った。スクロース分解活性の測定にはSomogyi法を用いた。結果および考察:Somogyi法により遺伝子ライブラリーの213個のクローンをスクリーニングしたところ2つのポジティブクローン,pYTK100(9.3kb)およびpYTK104(7.7kb)を得た。この2つの組換え体DNAの遺伝子地図は互いに異なっていた。pYTK100を含む大腸菌はGTF活性を示したが,pYTK104を含む大腸菌はスクロース分解活性のみを示した。また,pYTK100がコードするGTFは水溶性グルカン合成活性を示し,その酵素活性はプライマーとしてdextran T10 を添加しても変化しなかった。S.sobrinusには菌体外GTFとスクロースを分解する菌体内インペルターゼ(sucrose-6-phosphate hydrolase)が存在することが知られている。今回クローニングした2つの遺伝子はこれらの酵素をコードしているのではないかと考えられる。文献:1)磯部 他,1991,口腔衛生会誌41:732-734.

Objective: Streptococcus sobrinusf, bacteria inside and outside の で の ス ク ロ ー ス metabolic に よ り decay を 発 raw さ せ る. I 々 伝, s. sobrinus OMZ176 <s:1> gtf regenitor 伝 arranged the <s:1> base arrangement of を row 隣,隣 connected to するopen reading frame が base arrangement がStreptococcus downei MFe28 strains の gtfS heritage 伝 son の salt base with column と very に よ く like て い る た め, 2 つ の GTF heritage 伝 son が 隣 し, オ ペ ロ ン form を し て い を る possibility in し た ^ > < 1). This study で は GTF を は じ め と す る ス ク ロ ー ス traces of metabolic enzyme の 伝 subgroup の position を masato department of deep る た め, ス ク ロ ー ス を shown す enzyme decomposition activity の heritage 伝 son ク ロ ー ニ ン グ を try み た. Methods: s. sobrinus SSL strains (ATCC33478, Type strain の chromosome DNA を PstI で after cutting, プ ラ ス ミ ド pUC19 を with い て heritage 伝 son ラ イ ブ ラ リ ー を made し た. Determination of GTF active の は 29 mm [^ < > 14 C] sucrose を い, generate し た [^ < > 14 C] glucan を グ ラ ス フ ァ イ バ ー フ ィ ル タ ー に set on め て incorporated, ラ ジ オ ア イ ソ ト ー プ line method で っ た. Youdaoplaceholder0, ロ, ス, ス decomposition activity <s:1> determination に, <s:1>, Somogyi method を use た た. Results お よ び investigation: the Somogyi method に よ り posthumous son 伝 ラ イ ブ ラ リ ー の 213 の ク ロ ー ン を ス ク リ ー ニ ン グ し た と こ ろ 2 つ の ポ ジ テ ィ ブ ク ロ ー ン, pYTK100 (9.3 KB) お よ び pYTK104 た を (7.7 KB). The 伝 sub-map of the え body DNA heritage of the え group of え is <s:1> に different なって た た た. を pYTK100 を containing む coliform は GTF activity in し た が, pYTK104 を containing む coliform は ス ク ロ ー ス decomposition activity の み を shown し た. ま た, pYTK100 が コ ー ド す る GTF は water-soluble グ ル カ ン を し, synthetic activity そ の enzyme activity は プ ラ イ マ ー と し て dextran T10 を add し て も variations change し な か っ た. S.s obrinus に は bacteria in vitro GTF と ス ク ロ ー ス を decomposition す る bacteria in vivo イ ン ペ ル タ ー ゼ (sucrose - 6 - phosphate hydrolase) exist が す る こ と が know ら れ て い る. Today back to ク ロ ー ニ ン グ し た 2 つ の heritage 伝 son は こ れ ら の enzyme を コ ー ド し て い る の で は な い か と exam え ら れ る. Reference :1) Isobe,1991, Journal of Oral Hygiene, 41:732-734.

项目成果

磯部 豊: "Streptococcus sobrinus SL1株のgtf遺伝子のクローニング" 口腔衛生会誌. 43. 104-112 (1993)

Yutaka Isobe：“远缘链球菌 SL1 菌株 gtf 基因的克隆”口腔卫生学会杂志 43. 104-112 (1993)。

磯部 豊 他: "DNAフィンガープリント法によるS.sobrinus SL-1とOMZ176の染色体DNAの比較" 口腔衛生会誌. 41. 729-731 (1991)

Yutaka Isobe 等人：“使用 DNA 指纹法比较 S. sobrinus SL-1 和 OMZ176 的染色体 DNA”《口腔卫生学会杂志》41. 729-731 (1991)。

磯部 豊 他: "S.sobrinus OMZ176のgtf p1遺伝子上流域のDNAシークエンス" 口腔衛生会誌. 41. 732-734 (1991)

Yutaka Isobe 等人：“S. sobrinus OMZ176 中 gtf p1 基因上游区域的 DNA 序列”口腔卫生学会杂志 41. 732-734 (1991)。

N.HANADA. Y.ISOBE 他: "Nucleotide sequence analysis of Hu gtfTgen from S.sobrinus OMZ176" Infection and Immunity. 61. 2086-2103 (1993)

N.HANADA. Y.ISOBE 等人：“来自 S.sobrinus OMZ176 的 Hu gtfTgen 的核苷酸序列分析”感染和免疫。