上皮間充織相互作用における遺伝子発現プログラムの時間的空間的制御機構

上皮-间质相互作用中基因表达程序的时空控制机制

• 批准号: 13771106
• 负责人: 今井 一志
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The Nippon Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771106/
• 关键词: 歯牙; 発生; 形態形成; 遺伝子

C57BL6/Jマウス胎児Theiler stage 14-16の第一鰓弓前歯および臼歯部から採取したRNAを試料としてDD-SSCP(differential display-single strand conformation polymorphism)を行い、前臼歯部歯胚特異的遺伝子をクローニングした。得られたクローンをナイロン膜上に転写してスロットブロットハイブリダイゼーションを行い、疑陽性クローンを排除した。陽性クローンの塩基配列を決定し、それらの遺伝子について発現の部位および時期を決定するため、whole mount in situ hybridizationおよび組織切片を用いたin situ hybridiazation法を行い、いくつかのクローンで初期歯胚特異的遺伝子を明らかにした。これらについてマウス胎児cDNAライブラリーをスクリーニングし、完全長cDNAを得た。マウス胎児由来線維芽細胞(MEF)およびケラチノサイトにこれらのcDNAを遺伝子導入し、プロテオーム解析(2次元電気泳動法、質量分析、N末端アミノ酸シークエンス)を行い細胞表現形に対する作用を解析中である。表現形解析が終了しだい、早急に論文発表する予定でいる。また、特に興味深い発現パターンを示すクローンについて、遺伝子欠損マウス開発を目的としてBACゲノムライブラリーからゲノムDNAを単離し、PGK-NEO-tkカセットに繋いだコンストラクトの作成を開始する予定でいる。

C57BL6/Jマウス煐Theiler stage 14-16のFirst gill arch front 歯およびmortar 歯部からtaken したRNAをsample としてDD-SSCP (differential display-single strand conformation polymorphism), a polymorphism that is specific to the anterior acetabulum and the anterior acetabulum. It's written on the film of られたクローンをナイロン, and it's written on the film.ハイブリダイゼーションを行い, suspected positive クローンをexcluded した. positive クローンの塩配arrayをdeterminationし、それらの伝子について発appears part および Period をdeterminationするため、whole mount in situ Hybridization of tissue slices is performed using hybridization method in situ hybridization method, which is specific for early stage embryos.これらについてマウス特児cDNAライブラリーをスクリーニングし, complete length cDNAを得た. The origin of MEF cells and the solution of MEF in vitro Analysis (two-dimensional electrophoresis method, mass analysis, N-terminal aminic acid sterol), cell expression, morphology, and role are analyzed. The expression form analysis is finished, and the early urgent paper is written in advance. It's very interesting and interesting , the remaining child owes the loss of the masukai 発をpurpose and the としてBAC ゲノムライブラリーらゲノムDNA を単し, PGK-NEO-tk カセットに System いだコンストラクトの成をstart するpredetermined でいる.