電離放射線によるDNA障害修復過程における複製制御酵素Cdc7の動態解析

复制控制酶Cdc7在电离辐射引起的DNA损伤修复过程中的动态分析

• 批准号: 13771115
• 负责人: 角 忠輝
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771115/
• 关键词: Cdc7; Dbf4; 細胞周期; 放射線障害; UV; 細胞分化

今年度は、電離放射線および紫外線によるDNA障害の際に認められる、内在性のヒトCdc7並びにその調節因子であるDbf4の動態解析を行った。使用した細胞株は(1)ヒト白血病細胞株(U937,HL60)、(2)ヒト正常肺線維芽細胞株(IMR-90)、(3)ヒト毛細血管拡張性運動失調症皮膚細胞株(AT3BI, GMO2052A)である。結果は以下の通りである。1.Cdc7の基質であるMCM2タンパクに対する抗体を用いてウェスタンブロッティング法によりその発現量を観察したところ、分化誘導時にはどの細胞株でも遅くとも24時間以内に発現量は減少した。2.細胞周期の制御に関与するpRBタンパクとヒトCdc7の直接的な働きを調べるために、免疫沈降法を用いてウェスタンブロッティングを行ったが、両者に直接的な結合は見られなかった。3.DNA障害や分化誘導時に見られるCdc7の発現量の変化が、Cdc7タンパクのUbiquitinationとどのような関係を有しているかについて、プロテアソームインヒビターであるLactacystinを用いてその機序を調べた。プロテアソームの機能が阻害されているにもかかわらず、Cdc7の発現量に変動が見られたことから、Cdc7の発現制御がタンパク合成以前に行われている可能性が示唆された。4.RDS (Radioresistant DNA Synthesis)の状態を観察するため、上記1.(2)並びに(3)の細胞株に電離放射線照射を行い、ウェスタンブロッティング法により細胞内のCdc7の分布を観察した。Cdc7タンパクの発現は正常細胞では2時間の後に減少するが、AT3BI, GMO2052Aの両細胞株では発現に変動は無かった。

This year, ionizing radioactive rays, ultraviolet rays, DNA damage, DNA damage, internal nature, Cdc7 and regulatory factors, dynamic analysis of Dbf4, etc. The following cell lines were used: (1) Toto leukemia cell line (U937, HL60), (2) Toto normal lung fibroblast cell line (IMR-90), and (3) Toto capillary ataxia skin cell line (AT3BI, GMO2052A). The result is the following. 1.Cdc7 matrix MCM2 ンパクに対するantibody いてウェスタンブロッティング法によりそThe current amount of the cells is reduced within 24 hours during differentiation induction. 2. The control of cell cycle and the direct control of pRB control and Cdc7 are free of charge. The method of epidemic sedimentation is to use the いてウェスタンブロッティングを行ったが, or the direct combination of the は见られなかった. 3. DNA damage and differentiation induction, Cdc7's current amount, Cdc7's Ubiquitination, etc. It's a good relationshipターであるLactacystinを Use the いてその机 sequence and adjust the べた.されているにもかかわらず、Cdc7の発真人に変动が见られたことから、Cdc7の発开户 がタンパク Synthesis of the former に行われている possibility がshows instigation された. 4.RDS (Radioresistant DNA Synthesis) state of the art, the above mentioned 1. (2) and (3) of the cell line are ionized The distribution of Cdc7 in the cells was examined using the radioactive ray irradiation method. Cdc7 and GMO2052A cell lines have no and no changes after 2 hours of normal cells.