上顎洞原発小細胞癌培養細胞株における生物学的特性と分化誘導の検討

上颌窦小细胞癌培养细胞系的生物学特性及分化诱导研究

• 批准号: 13771246
• 负责人: 野口 一馬
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hyogo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771246/
• 关键词: 小細胞癌; 分化誘導

小細胞癌(SmCC)は、まれではあるが頭頸部領域においても発生し、放射線や抗癌剤に容易に耐性を獲得し、血行性転移を来しやすく、また主要臓器に容易に浸潤することから著しく予後不良である。われわれは上顎洞を原発とする小細胞癌の患者より培養細胞株を樹立した。本培養細胞株は免疫細胞化学染色においてNSE、GRP、CD56(N-CAM)を発現しており、肺原発小細胞癌と比較的類似した性質を持っていた。しかし、その細胞形態や増殖様式は肺原発のものと異なり、肺原発小細胞癌は浮遊細胞でコロニーを形成して増殖するのに対し、本培養細胞株は接着性を有し、上皮系悪性腫瘍培養細胞に似た増殖形態を示した。培養細胞を電子顕微鏡で観察すると、細胞質内に神経分泌顆粒の存在が示された。細胞の倍加時問は70.4時間で、immunoradiometric assay法を用いて培養上清中のNSEを測定したところ、細胞増殖と相関してNSEの増加を認めた。本培養細胞株はヌードマウス可移植性を有し、腫瘍重量とNSEとの間に相関関係が見られた。このように本培養細胞株は、肺原発小細胞癌培養細胞としての性質と上皮系悪性腫瘍の性質の両方を有しているものと考えられた。また、本培養細胞株は予備実験においてdb-cAMPを作用させると形態学的に神経細胞様に形態変化をすることが確認された。この細胞の形態変化に対するdb-cAMPの至適濃度は100〜250μg/mlであった。この現象を解析するために神経細胞に特異的に認められるneurofilament-Hの細胞内の発現を免疫細胞化学染色を用いて検討すると形態変化後に有意に強発現していた。さらに、未分化神経細胞から成熟神経細胞に分化する際に特異的に形成されるmicrotubule-associated protein (MAP)-2が経時的に増加していくことがウエスタンブロット法にて明らかとなった。このように本培養細胞株はdb-cAMPによって神経細胞に分化誘導される可能性が示唆された。以前より細胞における分化誘導では細胞内シグナル伝達系のp27の関与が報告されており、本細胞株の分化誘導に対してもp27の関与を検討したが、本細胞株の分化誘導にはp27の関与は認められなかった。最近、肺小細胞癌の分化誘導にはc-mycの関与が報告されたことから、現在われわれも本細胞株に対するmyc familyの関与を検討中である。

Small cell carcinoma (SmCC) can be easily developed in the head and neck region, and can be easily tolerated by radiation and anticancer agents. A cell line was established in culture from a patient with small cell carcinoma. The cultured cell lines showed similar characteristics to those of lung cancer by immunocytochemical staining for NSE, GRP and CD56 (N-CAM). The cell morphology and proliferation pattern of lung cancer cells are different from those of small cell carcinoma cells. Cultured cells were examined by electron microscopy and the presence of neurosecretory granules in the cytoplasm was indicated. Cell multiplication time 70.4 hours, immunoradiometric assay was used to detect NSE in culture supernatant, cell proliferation correlation was identified The correlation between transplantability, tumor weight and NSE of the cultured cell line was observed. The nature of this cell culture is not to be confused with the nature of lung cancer. The cultured cell lines were prepared for db-cAMP action and morphologically confirmed for neuronal morphology. The optimal concentration of db-cAMP for morphological changes of these cells is 100 ~ 250μg/ml. This phenomenon was analyzed by immunocytochemical staining for neurofilament-H and its expression was enhanced by morphological changes. In addition, when undifferentiated neurons differentiate from mature neurons, specific microtube-associated protein (MAP)-2 is formed. The possibility of inducing differentiation of these cultured cell lines against db-cAMP was demonstrated. The relationship between p27 and induction of differentiation of this cell line was discussed. Recently, the relationship between c-myc and induction of differentiation in small cell lung cancer has been reported. Now, the relationship between myc family and induction of differentiation in this cell line has been discussed.

项目成果

Kazuma Noguchi et al.: "Small cell neuroendocrine carcinoma of the maxillary sinus-a case report and n mouse transplantable model"HEAD & NECK. 24. 491-496 (2002)

Kazuma Noguchi 等人：“上颌窦小细胞神经内分泌癌 - 病例报告和小鼠移植模型”HEAD