歯周病関連細菌菌体表層成分が線維芽細胞におよぼす影響

牙周病相关细菌细胞表面成分对成纤维细胞的影响

• 批准号: 13771320
• 负责人: 大口 将弘
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Aichi Gakuin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771320/
• 关键词: Acinobacillus actinomyectemcomitans; LPS; IL-6; IL-8; 線維芽細胞; capsular polysaccharide antigen

歯周病関連細菌であるAcinobacillus actinomyectemcomitans(以下A.a.)の宿主に対する影響が菌体内また菌体外産物を用い調べられている.我々は,A.a.莢膜多糖抗原(capsular polysaccharide antigen以下CPA)に着目し,CPAの破骨細胞形成能ならびに骨吸収活性について研究してきた.しかし,CPAの歯肉線維芽細胞(human gingival fibroblast以下HGF)におよぼす影響についての報告は見られない.そこで今回,HGFをCPAで刺激した場合の炎症性サイトカインであるIL-6,IL-8に対する影響について調べることとした.A.a.は血清型b型のY4株を使用し,Amanoら(Infect. Immun. 1989:57, 2942-2946)の方法に従いCPAを精製した.また,LPSは温フェノール-水抽出法により精製した.HGFは,愛知学院大学歯学部附属病院歯周病科において歯周基本治療の終了した患者から歯肉組織を採取し,各組織片からHGFをout growthさせ,37℃5%CO_2条件下10%牛胎児血清添加ダルベッコ変法イーグル培地で4-10代継代したHGFを実験に使用した.HGFは2×10^4個に調製し48穴プレートに播種した.A.a.CPA(1〜100μg/ml),LPS(1μg/ml)を添加し,3-24時間培養した.培養上清を回収し,上清中のIL-6,IL-8はELISA kitにて測定した.さらに抗CPAモノクローナル抗体(100μg/ml)をHGFと共培養した場合の培養上清も同時に調べた.添加した各刺激因子によるHGF形態を調べるため走査型顕微鏡で観察し,比色定量法により生細胞数を測定した.本研究より(1)HGFに添加した各刺激因子の有無にかかわらず,HGFの形態と細胞数に変化は見られなかった.(2)CPA添加によりHGFからのIL-6とIL-8の産生が抑制された.(3)LPSにより刺激されたHGFからのIL-6とIL-8の産生もCPA添加により抑制された.(4)CPAによる抑制効果はCPAに対するモノクローナル抗体の添加により完全にブロックされた.今回の報告より,CPAは,破骨細胞のみならずHGFにも影響をおよぼすことが明らかとなった.本研究をJ. Periodontal. Res2003:38, 191-197にまとめ報告した.

Acinobacillus actinomyectemcomitans(hereinafter A.a.) In vitro production of bacteria affected by host cells. A. A. capsular polysaccharide antigen (CPA) has been studied for its osteoclast formation and bone resorption activity. The effects of CPA on human gingival fibroblast (HGF) are reported. In this case,HGF is used to stimulate inflammatory cells in situations where IL-6 and IL-8 are involved in the regulation of A.a. and Y4 strains of serotype b. Amano (Infect. Immun. 1989:57, 2942-2946). HGF was extracted from the dental tissue of patients at the end of basic treatment in the Department of Periodontology, Aichi Gakuin University Dental Hospital. 10% fetal bovine serum added at 37℃ with 5% CO_2 for 4-10 generations HGF was used. HGF 2×10^4 was prepared for 48 generations.A.a.CPA(1 ~ 100μg/ml) and LPS(1μg/ml) were added for 3 -24 generations. IL-6 and IL-8 in culture supernatant were detected by ELISA kit. Anti-CPA antibody (100μg/ml) and HGF co-culture supernatant were simultaneously adjusted. HGF morphology was modulated by adding various stimulating factors, and the number of cells was determined by colorimetric quantitative method. In this study,(1)HGF was added to the medium, and there was no change in the morphology and cell number of HGF. (2)CPA addition inhibits the production of IL-6 and IL-8 by HGF. (3)LPS stimulates the production of IL-6 and IL-8 by HGF, and CPA inhibits them. (4)CPA inhibition effect is the CPA response to the addition of antibodies to complete the inhibition effect. This report shows that CPA has no effect on osteoclasts and HGF. This study was conducted by J. Periodontal. Res2003:38, 191-197.

项目成果

Ohguchi Y, Ishihara Y, Ohguchi M, Koide M, Shirozu N, Naganawa T, Nishihara T, Noguchi T.: "Capsular polysaccharide from Actinobacillus actinomycetemcomitans inhibits IL-6 and IL-8 production in human gingival fibroblast"J Periodontal Res. 38(2). 191-197

Ohguchi Y、Ishihara Y、Ohguchi M、Koide M、Shirozu N、Naganawa T、Nishihara T、Noguchi T.：“Actinobacillus actinomycetemcomitans 的荚膜多糖抑制人牙龈成纤维细胞中 IL-6 和 IL-8 的产生”J 牙周研究。

Ohguchi Y, Ishihara Y, Ohguchi M, Koide, M, Murase Y, Naganawa T, Nishihara T.: "Actinobacillus Actinomycetemcomitans capsular polysaccharide inhibits IL-6 and IL-8 production"Journal of Dental Research. 80. 768 (2001)

Ohguchi Y、Ishihara Y、Ohguchi M、Koide M、Murase Y、Naganawa T、Nishihara T.：“Actinobacillus Actinomycetemcomitans 荚膜多糖抑制 IL-6 和 IL-8 的产生”牙科研究杂志。