Siglec2(CD22)の糖鎖リガンドのB細胞機能への役割の探索

探索 Siglec2 (CD22) 碳水化合物配体对 B 细胞功能的作用

• 批准号: 13771381
• 负责人: 竹松 弘
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771381/
• 关键词: シアル酸; B細胞; CMP-NeuAc水酸化酵素; Singlec2(CD22); 糖鎖; FACS

CMP-NeuAc水酸化酵素反応は細胞質中の糖供与体のCMP-NeuAcからCMP-NeuGcを生合成するMonooxygenaseである。この反応は自然界に多種存在するシアル酸の修飾の一つを担う反応であり、今回、この反応系での律速酵素であるCMP-NeuAc水酸化酵素遺伝子欠損マウスを作製した。この反応が欠損することで、マウスB細胞膜上に存在するB細胞受容体の共受容体分子であるSiglec2(CD22)を介した分子認識に必要な糖鎖リガンドの生合成がおこらない事が予想される。ここではまず、Siglec2(CD22)の糖鎖リガンドを欠損しているかどうかをシアル酸分子種の同定法であるDMB法を用いて解析した。この結果、遺伝子欠損マウスにおいてはSiglec2(CD22)が認識できる、NeuGcタイプのシアル酸が欠損していることが明らかになった。次に、末梢血において赤血球、白血球及び血小板数を測定したところ、遺伝子欠損による各細胞数の顕著な変化は見られなかった。また、この遺伝子欠損の免疫担当細胞の成熟に対する影響を解析した。成熟したマウスより免疫担当組織である骨髄、胸腺、脾臓及び末梢血をとり、FACSを用いて各免疫担当細胞構成及び分化に及ぼされている影響の解析の結果、末梢血、胸腺、脾臓及び骨髄での免疫細胞系分化は正常の範囲内であることが明らかとなった。B細胞活性化におけるマウスの表現型の解析の結果、CMP-NeuAc水酸化酵素遺伝子欠損マウスでは胸腺非依存性抗原であるDNP-Ficollに対して増強された免疫応答を示した。これらの解析より、Siglec2(CD22)の糖鎖リガンドを欠損によりSiglec2(CD22)自身の欠損と同様、B細胞は高反応性の表現型を示すことが明らかとなった。

CMP-NeuAc hydroacidifying enzyme is responsible for the synthesis of CMP-NeuAc and CMP-NeuGc in the cytoplasm. This reaction is responsible for the modification of various enzymes in nature, such as CMP-NeuAc, CMP-NeuAc and CMP-NeuAc. Siglec2 (CD22), a co-receptor molecule that exists on the membrane of B cells, is essential for molecular understanding of glycophosphorin biosynthesis. The analysis of the molecular species of Siglec2(CD22) by the DMB method was carried out. The result of this study is that the loss of the gene is due to Siglec2(CD22), NeuGc 2(CD22) and NeuGc 2(CD22). The number of erythrocytes, leukocytes and platelets in the peripheral blood was measured. The number of cells in the peripheral blood was measured. Analysis of the effects of gene damage on the maturation of immune responsible cells The results of analysis of the composition and differentiation of immune cell lines in mature immune-bearing tissues, such as bone marrow, thymus, spleen and peripheral blood, and the effects of FACS on the differentiation of immune cell lines in peripheral blood, thymus, spleen and bone marrow are normal. The results of phenotype analysis of B cell activation and DNP-Ficoll response showed that CMP-NeuAc enzyme protein was deficient in thymic independent antigen. This analysis shows that Siglec2(CD22) is deficient in glucose and that Siglec2(CD22) itself is deficient in glucose and that B cells are highly reactive.

项目成果

T.Yamaji et al.: "Apoptosis of CTLL-2 cells induced by an immunosuppressant, ISP-I, is caspase-3 -like protease-independent"J. Biochem.. 129・4. 521-527 (2001)

T. Yamaji 等人：“免疫抑制剂 ISP-I 诱导的 CTLL-2 细胞凋亡不依赖于 caspase-3 样蛋白酶” J. Biochem.. 129・4 (2001)。

Kozutsumi Y. et al.: "Sphingolipids involved in the induction of multinuclear cell formation"Biochim Biophys Acta.. 1582(1-3). 138-143 (2002)

Kozutsumi Y.等人：“参与多核细胞形成诱导的鞘脂”Biochim Biophys Acta.. 1582(1-3)。