下痢症治療薬創出を目指したノーウォークウイルスタンパク質の構造と機能に関する研究

研究诺瓦克病毒蛋白的结构和功能，旨在创造治疗腹泻疾病的药物

• 批准号: 13771403
• 负责人: 染谷 雄一
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771403/
• 关键词: ノーウォークウイルス; ウイルス性急性胃腸炎; ウイルス性食中毒; プロテアーゼ; 活性中心; 小型球形ウイルス; 結晶化; X線結晶構造解析

ノーウォークウイルスはヒトに感染して急性胃腸炎(下痢症)を引き起こす。生カキ等の喫食による集団食中毒の原因ウイルスとしても注目され、小型球形ウイルス(SRSV)としてよく知られている。本ウイルスは細胞培養系で増殖させることができず、生化学的、分子生物学的研究はほとんど進展していない。本研究では、本ウイルスによる下痢症の治療薬開発を目指し、ノーウォークウイルスのひとつ、チバウイルスを研究対象とし、そのゲノムにコードされる3C様プロテアーゼの構造機能解析を行った。まず、本プロテアーゼがHis30とCys139の2残基から成る活性中心(catalytic dyad)を有することを明らかにした。キモトリプシン様プロテアーゼの活性中心は通常catalytic triadであり、この点でノーウォークウイルス3C様プロテアーゼはユニークである。更に精製酵素を用いて生化学的性状を調べたところ、至適pHが9.0付近、至適温度は37℃、低塩濃度(〜25mM NaあるいはK)で比較的活性が高い、2価陽イオン非依存性などが明らかになった。次いで、本プロテアーゼの立体構造をX線結晶構造解析で明らかにするために、結晶化を行った。N末端にHisタグを導入した本プロテアーゼを精製し、結晶化を行ったところ、結晶解析に供与しうる結晶を得ることができた。X線照射実験を行い、現在4.5Å程度の解像度のデータを得ている。

The infection of acute gastroenteritis (diarrhea) is caused by diarrhea. The reason of food poisoning in the group is that the food in the group is poisonous, and the food in the group is poisonous. The development of cell culture system, biochemistry and molecular biology has made great progress. This study aims to develop a therapeutic agent for diarrhea, and to analyze the structure and function of the drug. The two residues of His30 and Cys139 were found to be active in this study. The activity center of the mobile phone is usually catalytic triad. The purified enzyme was used to adjust its biochemical properties to pH = 9.0, temperature = 37℃, and low concentration (~ 25mM Na + K). The activity of the purified enzyme was higher than that of the purified enzyme. X-ray crystallographic analysis of the three-dimensional structure of the crystal N-terminal crystallization X-ray irradiation is now 4.5 degrees resolution.

项目成果

Yuichi Someya, Naokazu Takeda, Tatsuo Miyamura: "Identification of Active-Site Amino Acid Residues in the Chiba Virus 3C-like Protease"Journal of Virology. 76/12. 5949-5958 (2002)

Yuichi Someya、Naokazu Takeda、Tatsuo Miyamura：“千叶病毒 3C 样蛋白酶中活性位点氨基酸残基的鉴定”病毒学杂志。

染谷雄一ほか: "本邦臨床統計集1"日本臨床社. 616 (2001)

Yuichi Sometani 等：《日本临床统计集 1》Nihon Ryosha。 616 (2001)

Yuichi Somcya, Naokazu Takeda, Tatsuo Miyamura: "Identification of Active-Site Amino Acid Residues in the Chiba Virus 3C-like Protease"Journal of Virology. (印刷中). (2002)

Yuichi Somcya、Naokazu Takeda、Tatsuo Miyamura：“千叶病毒 3C 样蛋白酶中活性位点氨基酸残基的鉴定”病毒学杂志（2002 年）。