Screening of SARS-CoV-2 protease inhibitors using FlipGFP reporter system

使用 FlipGFP 报告系统筛选 SARS-CoV-2 蛋白酶抑制剂

• 批准号: 22K06625
• 负责人: 染谷 雄一
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06625/
• 关键词: SARS-CoV-2; プロテアーゼ; 阻害剤; FlipGFP

本研究課題はSARS-CoV-2のプロテアーゼをターゲットとしたFlipGFPレポーターシステムを利用して、様々な西洋薬や生薬から効果的にSARS-CoV-2プロテアーゼを阻害する候補化合物（物質）を同定することを目的としている。初年度はまず当該システムを駆使してSARS-CoV-2 3CLプロテアーゼ(pro)を阻害する生薬エキスを探索した。当該系は293T細胞にSARS-CoV-2 3CLproの切断配列を有するFlipGFP発現プラスミドおよびSARS-CoV-2 3CLpro発現プラスミドをトランスフェクションし、ハイコンテントイメージングシステム（Operetta CLS）によりGFP蛍光を呈する細胞をカウントすることで3CLpro活性を評価する。まず20種の生薬エキスについてスクリーニングを実施したところ、未処理群と比較して、4種の生薬エキス存在下でGFP陽性細胞数が80%以上低下した。次に、これら生薬の3CLpro阻害効果を市販のin vitro SARS-CoV-2 3CL Protease Activity Assay Kitを用いて再度検証したところ、２種の生薬で85%程度、２種の生薬で40%程度の活性阻害効果が認められた。さらに、現在FDA承認薬ライブラリー（1200種）を用いたスクリーニングを実施中であり、薬剤未処理群と比較して、GFP陽性細胞数を減少させる化合物を幾つか見出している。

This study aims to identify candidate compounds (substances) for SARS-CoV-2 to inhibit the growth of FlipGFP. In the early years, SARS-CoV-2 3CL was used to prevent the occurrence of diseases. When the FlipGFP gene expression pathway and SARS-CoV-2 3CLpro gene expression pathway were detected in 293T cells, the activity of 3CLpro was evaluated in Operetta CLS cells. The number of GFP positive cells in 20 kinds of biological agents was 80% lower than that in untreated group. The 3CLpro inhibitory effect of these two biochemicals was retested in vitro SARS-CoV-2 3CL Protein Activity Assay Kit, and the inhibitory effect of these two biochemicals was found to be 85% and the inhibitory effect of these two biochemicals was found to be 40%. Today, FDA recognizes that the number of GFP-positive cells in the untreated population is reduced when compared to the untreated population.

项目成果

生薬成分によるFurin cleavage site（FCS）開裂抑制およびSARS-CoV-2感染抑制効果

生药成分抑制弗林蛋白酶裂解位点（FCS）裂解和SARS-CoV-2感染的作用

• 发表时间: 2022
• 期刊: 月刊「細胞」
• 作者: Hayashi Yasuhiro;Matsuda Kouki;Tanigawa Kazunari;Tanikawa Takashi;Maeda Kenji;Tsuchiya Kiyoto;北村雅史，谷川 尚，林 豪士
• 通讯作者: 北村雅史，谷川 尚，林 豪士