マウス雄性生殖細胞の減数分裂期に発現する新規bHLH型転写因子の機能解析

小鼠雄性生殖细胞减数分裂过程中表达的新型 bHLH 型转录因子的功能分析

• 批准号: 13780553
• 负责人: 吉田 松生
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780553/
• 关键词: マウス; 精巣; 精原細胞; 転写因子; bHLH; 転写制御因子; 生殖細胞; 減数分裂

本研究では、bHLH型転写因子Okadin/Math6の機能解析を通してマウス雄性生殖細胞の分化制御機構に迫る。我々は、酵母two-hybrid法をもちいて、成体マウス精巣cDNAライブラリーから新規bHLH型転写因子Okadin(その後他グループによりMath6として報告された)を単離した。Okadinの発現は、胎生7.5-8.5日胚の内胚葉(特に前腸)と、成体においては精巣および卵巣に特に強く認められた。Okadinの雄性生殖細胞における発現の詳細な解析Northern blotting, cDNA cloning, data base検索により、Okadinが少なくとも4種類の異なった転写産物を生じていることが明らかにした。in situ hybridizationにより、雄性生殖系列においては、機能的タンパク質をコードするmRNAは、出生直後の精原細胞や胎生期の精原母細胞に主に発現していること、一方、減数分裂期に発現するmRNAは、明らかな機能的タンパク質をコードしていない事が強く示唆された。そのため、Okadin/Math6の精子形成細胞のおける主な作用点は胎児期から出生直後の幼若な精子形成細胞であることが考えられる。一方我々は、他のbHLH型転写因子1P19が未分化な精原細胞で発現、機能していることを示すデータを得ており、複数のbHLH因子がお互いに関連して精子形成の初期に機能している可能性を検討中である。Okadinの転写制御因子としての機能解析一過的遺伝子導入実験(luciferase assay)により、bHLH因子の共通の標的配列e-boxに対して単独での転写活性化能は認められなかったが、他のbHLH因子であるMyoDによる転写活性化を抑制する能力を持っていた。

In this study, we analyzed the function of Okadin/Math6 in male germ cells. The yeast two-hybrid method is used to modify the adult version of the cDNA sequence. The bHLH gene Okadin is used to modify the yeast two-hybrid method. Okadin development, viviparous 7.5-8.5 days embryo endoderm (especially foregut), adult embryo embryo embryo Northern blotting, cDNA cloning, data base analysis of Okadin male germ cell development in detail, Okadin four species of different writing products. In situ hybridization, mRNA expression in the male reproductive series indicates the presence of functional proteins in spermatogonia after birth and in spermatogonia during gestation. Okadin/Math6 Sperm forming cells and their main action points are fetal and postnatal sperm forming cells. The possibility that multiple bHLH factors may be related to each other and function in the early stages of spermatogenesis is discussed. Okadin's gene control factor and its function analysis have been analyzed to determine the gene transfer (luciferase assay), bHLH factor and common target allocation e-box, and the ability to independently identify and suppress the gene activation of MyoD by other bHLH factors.

项目成果

S.Yoshida et al.: "Sgn1, a basic helix loop helix transcription factor delineates the salivary gland duct cell lineage in mice"Developmental Biology. 240. 517-530 (2001)

S.Yoshida 等人：“Sgn1，一种基本螺旋环螺旋转录因子，描绘了小鼠唾液腺导管细胞谱系”《发育生物学》。

K.Ohbo, S.Yoshida, M.Ohmura, O.Ohneda, M.Ogawa, H.Tsuchiya, T.Kuwana, J.Kehier, K.Abe, HR.Scholer, T.Suda: "Identification and characterization of stem cells in pre-pubertal spermatogenesis in mice"Developmental Biolobgy. (in press). (2003)

K.Ohbo、S.Yoshida、M.Ohmura、O.Ohneda、M.Okawa、H.Tsuchiya、T.Kuwana、J.Kehier、K.Abe、HR.Scholer、T.Suda：“茎的识别和表征

R.Mizuguchi et al.: "Combinational role of Olig2 and Neurogenin2 in the coordirated induction of pan-neuronal and subtype-specific properties of motoneurons"Neuron. 31. 757-771 (2001)

R.Mizuguchi 等人：“Olig2 和 Neurogenin2 在协调诱导运动神经元的泛神经元和亚型特异性特性中的组合作用”Neuron。

H.Takebayashi, Y.Nabeshima, S.Yoshida, O.Chisaka, K.Ikenaka, Y-i.Nabeshima: "The basic helix-loop-helix factor Olig2 is essential for development of motoneuron and oligodendrocyte lineages"Current Biology. 12. 1157-1163 (2002)

H.Takebayashi、Y.Nabeshima、S.Yoshida、O.Chisaka、K.Ikenaka、Y-i.Nabeshima：“基本螺旋-环-螺旋因子 Olig2 对于运动神经元和少突胶质细胞谱系的发育至关重要”当前生物学。