ジーンノックアウト法を用いた高等真核生物GCN5ファミリーの機能解析

利用基因敲除法分析高等真核生物GCN5家族的功能

• 批准号: 13780561
• 负责人: 菊池 秀彦
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: 宮崎医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780561/
• 关键词: DT40; GCN5; P; CAF; 細胞周期; ジーンノックアウト; ヒストンアセチルトランスフェラーゼ

本研究課題は、ヒストンアセチルトランスフェラーゼの一種GCN5ファミリー(GCN5,P/CAF)の生理機能をDT40を用いたジーンノックアウト法によって解析することを目的とする。GCN5ホモ欠損変異株は細胞増殖能の顕著な低下を示し、それはG1→Sの移行阻害が主たる原因であることが明らかとなった。この事実から、GCN5が細胞周期、特にG1→S移行に関わる遺伝子の発現制御を担っている可能性が強く示唆された。そこで、これまでにニワトリにおいて単離されている細胞周期制御関連遺伝子の発現変化をGCN5ホモ欠損変異株において調べた。その結果、GCN5ホモ欠損変異株では細胞周期制御に関わる遺伝子、c-myc,サイクリンD2およびサイクリンG1の発現が増加し、PCNA、サイクリンD3、E2F4およびp107の発現が減少していることが示された。また、アポトーシス抑制遺伝子であるbcl-2(増加)とbcl-xL(減少)にも顕著な発現の変化が認められた。これらの知見から、これらの遺伝子の発現を直接的もしくは間接的にコントロールすることで、GCN5が細胞周期および細胞死の制御において重要な働きを担っていることが示唆された。さらに、GCN5ファミリーのもう一つの遺伝子であるP/CAFの発現が顕著に増加していることが明らかとなったが、これは欠損したGCN5の機能の一部を相補する役割を果たしているものと推察される。また、抗アセチル化ヒストン抗体を用いたイムノブロット解析の結果、ヒストンH3やH4のアセチル化パターンにも大きな変化が認められるなど、興味深い知見が数多く得られた。このGCN5ホモ欠損変異株をさらに詳細に解析することにより、未だ不明な点の多いGCN5の生理機能の解明が一層進展するものと期待できる(投稿準備中)。

The purpose of this study is to analyze the physiological function of GCN5 (P/CAF) by using DT40. GCN5 is a poor mutant plant, and its ability to grow is low. The cell cycle, especially G1→S transition, is related to the possibility of gene development and regulation. The development of cell cycle control related genes is regulated by GCN5. As a result, the expression of GCN5, c-myc, D2 and G1 increased, PCNA, D3 and E2F4 decreased, and the expression of p107 decreased. BCL-2(increase) and BCL-xL (decrease) are the most important factors affecting the development of the disease. This knowledge is directly related to the development of cell cycle and cell death. In addition, the GCN5 has been developed to complement the GCN5's functions. The results of the analysis of the anti-tumor antibody, anti-tumor antibody, anti-tumor The detailed analysis of GCN5's physiological function is still unknown, and the progress of GCN5's physiological function is expected (submission preparation).