核蛋白質輸送効率制御機構の解析

核蛋白转运效率调控机制分析

• 批准号: 13780572
• 负责人: 立花 太郎
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780572/
• 关键词: 核移行シグナル; リン酸化; Ran

これまでに競合阻害がおこらない程度の核蛋白質(核移行シグナル)を細胞質に導入すると、全体の核蛋白質輸送効率が上昇するという現象を見いだし、それが核移行シグナル(NLS)依存的なリン酸化反応に依存することを明らかにしている。本現象の分子メカニズムを解明するため、核移行シグナル依存的にリン酸化されるタンパク質の同定を行った。これまでに知られている核蛋白質輸送に関与する因子の中から核移行シグナル依存的にリン酸化されるものを検索した結果、RanGAP1ならびにRanBP3が細胞質抽出液中において核移行シグナル依存的にリン酸化されることがわかった。RanGAP1、RanBP3ともに低分子量G蛋白質Ranの制御因子である。低分子量G蛋白質Ranは核蛋白質輸送過程において中心的な役割を果たす因子であり、その制御蛋白質が核移行シグナル依存的にリン酸化されることは核蛋白質輸送効率制御機構を考える上で非常に興味深い。そこで、RanGAP1、RanBP3の細胞内での機能をさらに解析するため、各因子に対するモノクローナル抗体の作製を試みた。これまで核蛋白質輸送因子に対するモノクローナル抗体の作製は主にマウスを用いられてきたが、その抗原性の低さなどからあまり成功していない。そこで、本研究ではラットリンパ節由来のリンパ球を用いて抗体の作製を行ったところ、各因子に対する特異的な抗体を合成するハイブリドーマ細胞を樹立することに成功した。各抗体の性質を検討したところ、これらの抗体は核蛋白質輸送効率制御機構を明らかにするためのツールとして非常に有用であることがわかった。

The nuclear protein (NLS)-dependent protein is introduced into the cytoplasm and the overall nuclear protein transport rate increases. The molecular structure of this phenomenon is explained by the nuclear transition mechanism, which depends on the molecular structure of the molecule. This is the result of finding out the factors involved in nuclear protein transport and nuclear migration dependent factors, RanGAP1 and RanBP3, and nuclear migration dependent factors in cytoplasmic extracts. RanGAP1, RanBP3, Ran and other regulatory factors Low molecular weight G protein Ran is very interesting in the study of nuclear protein transport efficiency control mechanism due to the effect factors of nuclear protein transport process and the dependence of nuclear migration on protein acidification. Analysis of the intracellular functions of RanGAP1 and RanBP3, and the preparation of antibodies against each factor This protein transport factor was successfully used in the manufacture of anti-human antibodies. In this study, the origin of the antibody was determined by the factor analysis. The properties of each antibody are discussed in detail below.

项目成果

Shikata, K.: "Synthesis of non-natural C2-homo-ceramide and its apoptotic activity against HL-60 cells"Bioorg. Med. Chem. Lett.. (in press). (2003)

Shikata, K.：“非天然 C2-同型神经酰胺的合成及其对 HL-60 细胞的凋亡活性”Bioorg。

Azuma, H.: "Total syntheses of Symbioramide derivatives from L-serine and their antileukemic activities"J. Org. Chem.. (in press). (2003)

Azuma, H.：“L-丝氨酸的 Symbioramide 衍生物的全合成及其抗白血病活性”J.

Shikata, K.: "Synthesis of novel and non-natural ceramide analogues derived from L-glutamic acid"Tetrahedron. 58. 5803-5809 (2002)

Shikata, K.：“从 L-谷氨酸衍生的新型非天然神经酰胺类似物的合成”四面体。

Hiroaki, Y.: "A new technique to co-localise membrane proteins with Homer/vesl"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 295. 756-765 (2002)

Hiroaki, Y.：“一种与 Homer/vesl 共定位膜蛋白的新技术”Biochem。