telomeric repeat elongation assayの開発

端粒重复延伸检测的发展

• 批准号: 13770093
• 负责人: 前沢 千早
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Iwate Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770093/
• 关键词: TRE; テロメア; 相互作用; がん; 分子標的治療; TRAP

表面プラズモン共鳴現象を応用した,生体内分子間相互作用解析装置を用いて,定量的テロメラーゼ活性の評価法telomeric repeatelongation (TRE) assay を開発した.TRE assayはBio sensor chipと呼ばれる金薄膜のコートされた1cm^2程のチップ上に,G-quartet構造を持った50bp程のDNA断片を固定化する.次に,テロメラーゼ抽出物ををロードし,結合・伸長・解離・再生を行う.得られたセンサーグラムから伸長の結果生じた重量変化をe-valueとした.本法の特徴は (1)PCR法を用いていないので,従来のTRAP法で生じていたPCR inhibitorの混入によるfalse-negativeがない(2)塩基の伸長速度を直接計測できる(3)電気泳動を必要としないone-step操作なので,ピペット操作や泳動操作の際に生じる誤差がない.(4)デンシトメータあるいはELISAによる計測の必要がない.(5)短時間にnon-labelingで解析可能である.などの利点があった.TRE assayはnon-labelingで,これまでのTRAP法による阻害効果の検討時間を1/50程に短縮する事が可能であり,本法を用いたテロメラーゼ阻害物質のスクリーニングが可能である.TRE assayは新規テロメラーゼ阻害剤の発見に効果を発揮し,テロメラーゼを標的とした分子標的治療法の開発に大いに貢献すると思われた.

A device for analyzing molecular interactions in vivo has been developed to quantitatively evaluate the activity of a Bio sensor chip by a telomeric repetition (TRE) assay. The TRE assay immobilizes DNA fragments of a 50bp range on a thin gold film with a G-quartet structure. Next, the extraction process, combination, elongation, dissociation and regeneration process. The result of this is that the weight of the product is reduced to e-value. The characteristics of this method are as follows: (1)PCR method is used in the middle,(2) PCR inhibitor is mixed in the false-negative,(3) Electrophoresis is necessary in the one-step operation,(4) PCR inhibitor is mixed in the false-negative,(5) the elongation velocity of the substrate is measured directly,(6) electrophoresis is necessary in the one-step operation, and (7) there are errors in the operation of electrophoresis. (4)The ELISA assay is necessary for the detection of the virus. (5)Short time non-labeling resolution. The TRE assay is non-labeling, and it is possible to shorten the detection time of the inhibition effect by 1/50 of the TRAP method. It is possible to use the TRE assay in the detection of the inhibition effect by the TRAP method.

项目成果

Tarusawa M.: "Quantitative assessment of minimal residual disease in childhood lymphoid malignancies using an allele-specific oligonucleotide real-time quantitative polymerase chain reaction"Int Hematol. 75・2. 166-173 (2002)

Tarusawa M.：“使用等位基因特异性寡核苷酸实时定量聚合酶链反应对儿童淋巴恶性肿瘤的微小残留病进行定量评估”Int Hematol 75・2（2002）。

Ikeda K: "Chemoradiotherapy followed by surgery for thoracic esophaqeal cancer potentially or actually involving adjacent organs"Dis Esophagus. 14・3-4. 197-201 (2001)

Ikeda K：“胸部食管癌可能或实际上累及邻近器官的放化疗后手术”Dis Esophagus 14・3-4 (2001)。