フラビウイルスの遺伝子再結合に関する研究

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フラビウイルスの遺伝子再結合を検討するため、まずはじめにダニ媒介性脳炎ウイルスの感染性cDNAクローンを作製した。しかしながら、最初に作製した感染性cDNAクローン(Oshima IC10)は親株と少し異なる性質を持っていたため、親株と全く同じ塩基・アミノ酸配列をもったものを作製する必要が生じた。そこで、Oshima IC10をもとに塩基配列の異なる部分を親株のものに置き換えてcDNAプラスミドを構築し直した結果、親株とほぼ同じ性質をもった感染性cDNAクローンの作製に成功した。また、このcDNAクローンは大腸菌のなかで増幅する際にも非常に安定であることがわかった。したがって、遺伝子再結合を起こした(キメラ)ウイルス株を人工的に作製することが可能になった。一方、現在までに分離された北海道、極東ロシアのダニ媒介性脳炎ウイルス株について、エンベロープ蛋白領域の塩基配列を基に、系統樹解析・Slide Window等を用いて遺伝子再結合を起こした可能性のある株があるかどうか検討した。しかしながら、エンベロープ蛋白領域においてはその可能性を示す株はこれまで得られなかった。したがって、非構造蛋白のような他の遺伝子領域について検討する必要が生じた。また、ダニ媒介性脳炎ウイルスが効率よく感染・増殖する培養細胞としてはBHK細胞などの哺乳類細胞がよく使われてきた。しかし、ダニ由来細胞についてはほとんど報告がなかった。そこで最近確立されたダニ由来細胞DALBE株およびISE株を用いてその感染性を検討し、ダニ媒介性脳炎ウイルスはDALBE株およびISE株に効率よく感染・増殖することを明らかにした。今後これらの細胞を用いての解析が可能になった。