フラビウイルスの遺伝子再結合に関する研究

黄病毒基因重组研究

• 批准号: 02J00012
• 负责人: 早坂 大輔
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J00012/
• 关键词: ダニ媒介性脳炎ウイルス; 感染性cDNAクローン; 遺伝子再結合

フラビウイルスの遺伝子再結合を検討するため、まずはじめにダニ媒介性脳炎ウイルスの感染性cDNAクローンを作製した。しかしながら、最初に作製した感染性cDNAクローン(Oshima IC10)は親株と少し異なる性質を持っていたため、親株と全く同じ塩基・アミノ酸配列をもったものを作製する必要が生じた。そこで、Oshima IC10をもとに塩基配列の異なる部分を親株のものに置き換えてcDNAプラスミドを構築し直した結果、親株とほぼ同じ性質をもった感染性cDNAクローンの作製に成功した。また、このcDNAクローンは大腸菌のなかで増幅する際にも非常に安定であることがわかった。したがって、遺伝子再結合を起こした(キメラ)ウイルス株を人工的に作製することが可能になった。一方、現在までに分離された北海道、極東ロシアのダニ媒介性脳炎ウイルス株について、エンベロープ蛋白領域の塩基配列を基に、系統樹解析・Slide Window等を用いて遺伝子再結合を起こした可能性のある株があるかどうか検討した。しかしながら、エンベロープ蛋白領域においてはその可能性を示す株はこれまで得られなかった。したがって、非構造蛋白のような他の遺伝子領域について検討する必要が生じた。また、ダニ媒介性脳炎ウイルスが効率よく感染・増殖する培養細胞としてはBHK細胞などの哺乳類細胞がよく使われてきた。しかし、ダニ由来細胞についてはほとんど報告がなかった。そこで最近確立されたダニ由来細胞DALBE株およびISE株を用いてその感染性を検討し、ダニ媒介性脳炎ウイルスはDALBE株およびISE株に効率よく感染・増殖することを明らかにした。今後これらの細胞を用いての解析が可能になった。

The infection was caused by the combination of infectious cDNA infection and viral infection. In the first place, the infectious cDNA virus (Oshima IC10) was isolated from a small number of plants, and the whole plant had the same base as that of the whole plant. The results showed that some of the isolates were successfully linked to the same sex of the same sex as those of the infectious cDNA virus. The results showed that some of the isolates were successfully selected, and some of them were successfully selected. The results showed that some of the isolates were infected with the same sex, and the infectious cDNA infection was caused by the same sex. The results showed that they were successful. The temperature is very stable, the cDNA is very stable, the bacteria are very stable. It is possible that the artificial operation of the plant may be affected by the combination of the baby and the baby. On the one hand, they are now separated from Hokkaido, and the possibility of viral infection is recombined with the possibility that the virus is isolated from Hokkaido, that the protein field is linked to the base, that the Slide Window is analyzed, and that the possibility is recombined. In the field of protein, the possibility is indicated by the possibility that the plant will be affected. The production of protein is not necessary in other fields. The infection rate of infectious infectious diseases caused by viral media infection was significantly higher than that of BHK cells in mammalian cells. The reason for this is that the report has been reported in the first place. Recently, we have confirmed that the DALBE strain, the ISE strain, the infectious virus, the vector inflammatory disease, the DALBE strain, the ISE strain, the infectious strain, the infectious disease, the infection, the infection. In the future, we will use the word "cell" to analyze the possibility that we may have a problem.

项目成果

Yoshii K, et al.: "Enzyme-linked immunosorbent assay using recombinant antigens expressed in mammalian cells for serodiagnosis of tick-borne encephalitis"Journal of Virological Methods. 108(2). 171-179 (2003)

Yoshii K 等人：“使用哺乳动物细胞中表达的重组抗原进行酶联免疫吸附测定，用于蜱传脑炎的血清诊断”病毒学方法杂志。