ショウジョウバエ、パキシリン遺伝子の機能解析

果蝇桩蛋白基因的功能分析

• 批准号: 02J02231
• 负责人: 八木 良平
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Osaka Bioscience Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J02231/
• 关键词: パキシリン(paxillin); インテグリン(integrin); ショウジョウバエ(Drosophila); 形態形成(morphogenesis); PINCH; LIMドメイン(LIM domain); RNA干渉(RNA interference); 細胞骨格(cytoskeleton); 細胞運動(cell migration)

パキシリンはLIMドメイン等、複数の蛋白質結合モジュールで構成されるインテグリン裏打ち蛋白質である。RNAi法を用いショウジョウバエパキシリンホモログ(Dpxn)の発現抑制を行ったところ、成虫翅において形態異常が認められた。ショウジョウバエの翅は二層の上皮層が互いにインテグリン介して接着した構造をしており、Dpxnの発現抑制による表現型の一部(wing blister)はこの接着が阻害されたものと考えられた。従って、個体発生においてDPxnはインテグリン接着構造の安定化の一部を担うと考えられた。パキシリンのインテグリン接着構造への局在の一部はそのLIMドメインにより担われると考えられている。酵母ツーハイブリッド(Y2H)法を用いDpxnのLIMドメインと結合する因子を調べたところ、LIMドメインのみで構成される蛋白質PINCH(Dpinch)がDpxnのLIMドメインと結合することが明らかとなった。DpinchはY2H法において、それ自身とも結合性を示し、さらに抗Dpxn抗体をもちいた免疫沈降実験により、S2細胞内でDpxnとDpinchは複合体を形成することが明らかとなった。PINCH(Dpinch)はインテグリン裏打ち蛋白質の一つで、DPxn同様、翅上皮組織間の接着の安定化を担うことが知られている。このことから、Dpxn、Dpinch等のインテグリン裏打ちLIM蛋白質群がLIMドメイン介して複合体を形成することが、インテグリン接着構造の安定化の一部を担っているとの仮説を立てた。実際、羽化直前の翅のインテグリン接着構造において、Dpinchの発現抑制を行ったところ、インテグリン接着部位付近のアクチン細胞骨格に異常が生じると同時に、Dpxnの局在性が顕著に変化することが明らかとなった。現在、引き続き上記仮説の検討を行っている。

The protein binding mechanism is composed of a plurality of proteins, such as LIM, etc. RNAi method is used to inhibit the development of Dpxn and to identify morphological abnormalities in adult wings. The two layers of the upper cortex of the wing are connected to each other, and then the structure of the wing is connected to each other, and the expression of the Dpxn is inhibited. A part of the stability of the structure is considered to be the development of the individual. The next step is to construct a framework for the development of new technologies. Yeast PINCH (Y2H) method uses Dpxn and LIM to bind protein PINCH(Dpinch) and LIM to protein PINCH(Y2H). Dpxn and Dpinch complexes are formed in S2 cells by immunoprecipitation with anti-Dpxn antibodies. PINCH(Dpinch) is a protein inhibitor, a DPxn inhibitor, and an inhibitor of stability between wing epithelial tissues. The LIM protein group was formed as a part of the stabilization of the structure of the LIM protein complex. In fact, due to the formation of the connective tissue of the feathered wings, the suppression of the occurrence of Dpinch occurs, and abnormalities occur in the skeleton of the actin cells near the connective tissue. At the same time, it is clear that the local nature of Dpxn is transformed. Now, on the first day of the month, we will record the results of the survey.