細胞膜および核におけるイノシトールリン脂質情報伝達系による細胞機能制御機構

细胞膜和细胞核中肌醇磷脂信号转导系统的细胞功能控制机制

• 批准号: 02J02245
• 负责人: 山鹿 真幸
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Himeji Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J02245/
• 关键词: イノシトールリン脂質; ホスホリパーゼCδ1; RhoGAP; ラフト; ホスホリパーゼC; アクチン細胞骨格; マイクロドメイン; カベオラ; カベオリン; Rho

本研究では細胞内におけるホスファチジルイノシトール(PI)情報伝達系において重要な役割を果たしているホスホリパーゼC(PLC)δ_1の細胞内における活性制御機構および生理機能を明らかにするためにPLCδ_1結合タンパク質の性状解析をおこなった。PLCδ_1と相互作用するタンパク質としてクローニングされたp122は、これまでに低分子量GTP結合タンパク質Rhoに特異的なGTPase activating Protein(GAP)であること、PLCδ_1の酵素活性を亢進させることなどが明らかになってている。本研究ではまずp122が細胞内情報伝達のプラットホームとして機能している膜領域のラフトに存在することを明らかにした。ラフトを介した細胞機能の調節の一つに細胞内Ca^<2+>濃度の調節がある。神経細胞様細胞株PC12細胞をカルバコールで刺激すると細胞内Ca^<2+>濃度が上昇する。この時、p122を免疫沈降したところ刺激前と比べ共沈してくるPLCδ_1が増加した。また、ショ糖密度勾配遠心分離による解析から、カルバコールによる刺激でPLCδ_1が低密度画分に移行すること、この移行はイオノマイシン処理でも、また、細胞外Ca^<2+>を除去した条件下でも観察されたことからPC12細胞においてPLCδ_1はカルバコール刺激による細胞内Ca^<2+>貯蔵部位からのCa^<2+>放出によりラフトに移行し、p122と結合し、活性化されると考えられる。これらの結果からPLCδ_1はラフトで活性化されラフトを介した細胞内Ca^<2+>濃度の調節に関与していることが示唆された。

在这项研究中，我们分析了PLCδ_1结合蛋白的特性，以阐明磷脂酶C（PLC）Δ_1的机制和生理功能，该磷脂酶C（PLC）δ_1在细胞内磷脂酰肌醇（PI）信号系统中起重要作用。以前已经揭示出，p122是一种与PLCΔ_1相互作用的蛋白质的p122是GTPase激活蛋白（GAP），该蛋白（GAP）特异于低分子量GTP GTP结合蛋白RHO，并且增强了PLCδ_1的酶活性。在这项研究中，我们首先透露P122存在于膜区域的筏子中，该膜是细胞内信号传导的平台。 RAFT介导的细胞功能调节之一是细胞内Ca^<2+>浓度的调节。用卡巴醇刺激神经元样细胞系PC12细胞会增加细胞内Ca^<2+>浓度。目前，当P122免疫沉淀时，与刺激前相比，共沉淀PLCδ_1增加。此外，通过蔗糖密度梯度离心分析表明，PLCΔ_1在用卡巴醇刺激时迁移到低密度分数，即使在离子霉素治疗中也观察到这种迁移，并且在离子外的Ca^<2+>中迁移的条件也被删除，因此可以从ca^ca^ca^2 <2 <2 <2 <2 <2 <2 <2 <2由于卡尔巴乔刺激，与p122结合并激活。这些结果表明，PLCΔ_1在筏中被激活，并参与了RAFT介导的细胞内Ca^<2+>浓度的调节。

项目成果

Masaki Yamaga: "p122/RhoGAP, A PLCd1-IMTERACTING PROTEIN, IS LOCALIZED IN LIPID RAFTS"Cell Structure and Function. 27. 255 (2002)

Masaki Yamaga：“p122/RhoGAP，一种 PLCd1 相互作用蛋白，定位于脂质筏中”细胞结构和功能。

Masaki Yamaga: "APLCδ_1-binding protein, p122/RhoGAP, is localized in caveolin-enriched membrane domains and regulates caveolin internalization"Genes to Cells. 9・(1). 25-37 (2004)

Masaki Yamaga：“APLCδ_1 结合蛋白，p122/RhoGAP，位于富含小凹蛋白的膜结构域并调节小凹蛋白内化”9·(1) 25-37 (2004)。

Masaki Yamaga: "p122/RhoGAP, a PLCδ_1-interacting protein, is localized in lipid rafts."Cell Structure and Function. 27. 255 (2002)

Masaki Yamaga：“p122/RhoGAP 是一种 PLCδ_1 相互作用蛋白，位于脂筏中。”《细胞结构与功能》，27. 255 (2002)。

Hitoshi Yagisawa: "Regulation of the intracellular localization of phosphoinsitide-specific phospholipase Cδ_1"Advances in Enzyme Regulation. 42. 261-284 (2002)

Hitoshi Yagisawa：“磷酸肌醇特异性磷脂酶 Cδ_1 的细胞内定位的调节”酶调节进展 42. 261-284 (2002)。