ホスホリパーゼCδ1の表皮特異的欠損が全身性白血球増加を引き起こす機構の解明

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1. PLCδ1欠損マウスの表皮バリア異常についての詳細な解析を目的に、バリア脂質の量の測定を行ったところ、PLCδ1遺伝子欠損マウスにおいてはバリア脂質の減少が観察された。Outside-insideバリアの検討のために、皮膚外部からの色素の透過性についても検討を行ったところ、PLCδ1遺伝子欠損マウス表皮では色素の透過性が充進していることも明らかとなった。これらの結果により、表皮のPLCδ1の欠損が、表皮バリアの形成に異常をきたしていることが明らかとなった。2. ヒトケラチノサイトにおいてもPLCδ1の欠損によって同様の影響が示されるのかどうか検討を行うことにした。ヒト表皮細胞(Normal Human Epidermal Keratinocyte : NHEK)を用いて皮膚の構造を構築させた、"3次元培養皮膚"を作製、このサンプルを用いて色素の透過性などのバリア異常について検討した。その結果、PLCδ1を発現抑制したNHEKによる3次元培養皮膚サンプルでは色素透過性の充進、バリア脂質の減少など、マウスの表皮と類似したバリア異常が見られることが明らかとなった。3. 表皮のバリアには角質バリア、タイトジャンクションバリアが存在する。色素透過性の増大により、角質バリアに異常があることは確認されたので、タイトジャンクションバリアについてもPLCδ1の欠損が影響を与えているのかどうか、検討を行った。NHEK細胞を培養した際の、タイトジャンクションタンパク質、zo-1の発現について染色レベルでの検討を行ったところ、その異常が観察された。このことから、PLCδ1発現抑制NHEKではタイトジャンクション形成に異常をきたしており、その結果、バリア異常が引き起こされている可能性が示唆された。