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ニジマス生殖幹細胞をベクターとして用いた新たな遺伝子導入技法の開発

使用虹鳟鱼生殖干细胞作为载体开发新的基因转移技术

基本信息

批准号：
02J02417
负责人：
竹内裕
金额：
$ 2.5万
依托单位：
Tokyo University of Marine Science and Technology (2004)東京水産大学 (2002-2003)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

始原生殖細胞(PGC)は、生物の胚内で唯一、卵や精子への分化能力を持つ生殖幹細胞である。単離したPGCに遺伝子導入を行った後、それらのPGCを卵・精子へと分化させることができれば、より効率的な個体への遺伝子導入技術として利用できる。本年度は、PGCのインビトロ培養技術を習得するため、すでにマウスにおいてこの技術を確立しているC.Wylie研究室(シンシナチティ、米国)へ留学し、この技術を習得した。緑色蛍光タンパク質遺伝子を用いた遺伝子改変技術により可視化したマウスPGCを、初期胚から単離し、さまざまな成長因子とともに培養した。成長因子が、PGCの増殖に及ぼす影響を、共焦点顕微鏡を用いてリアルタイムに追跡した。その結果、1)増殖期にあるPGCは、繊維芽細胞増殖因子(FGF)に特異的に結合する2種類の受容体を発現すること、2)PGCは、体細胞において産生されたFGFシグナルを受容し、FGFシグナルの下流であるMAPK経路を活性化させていることを確認した。さらに、リコンビナンFGFの培養液への添加により、PGCの運動性が活発化されること、および、PGCの細胞死が抑制されることを発見した。これらの結果は、FGFがPGCの増殖に強く関与していることを示唆しており、魚類のPGCの培養法を検討していくうえでも、重要な知見である。

The primordial germ cells (PGC) are the only ones in the embryo of the organism, and the differentiation ability of the egg and sperm is maintained by the germline stem cells. After the single PGC is introduced, the egg and sperm are differentiated.せることができれば, よりefficiency of individual への缝子 introduction technology としてutilization できる. This year, PGC's training technology is accurate The establishment of C.Wylie Laboratory (シンシナチティ, the United States) is based on studying abroad and acquiring technology. Green 荍光タンパク性伝子を用いた缝子Change変TechnologyによりVisualizationしたマウスPGCを, early embryo から単出し, さまざまなgrowth factor とともにculture した. Growth factor, PGC proliferation and influence, and confocal microscopy tracking were used. Result, 1) Proliferative phase PGC, FGF (FGF) specific binding, 2 types of receptors, 2) PGCは、Somatic cell においてproduces されたFGFシグナルをacceptsし、FGFシグナルの流であるMAPK経路をactivationさせていることをconfirmationした.さらに、リコンビナンFGFのculture mediumへのaddedにより、PGCのmotilityがRevitalization of cells, cell death of PGC, suppression of cell death, and suppression of cell death.これらのRESULTは、FGFがPGCのgrowthに强く关与していることをshows instigationしており, fish のPGC の culture method を検していくうえでも, important knowledge である.