海産魚における代理親魚養殖の確立に向けた生殖細胞の異種間移植技術の開発

跨物种生殖细胞移植技术的发展用于建立海水鱼类替代亲鱼养殖

• 批准号: 18780144
• 负责人: 竹内 裕
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Tokyo University of Marine Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18780144/
• 关键词: クロマグロ; 生殖細胞; 精原幹細胞; 異種間移植; vasa遺伝子; 絶滅危惧種; 種苗生産; 養殖

申請者は、近年、魚類における異種間での生殖細胞移植技術(代理親魚養殖)を開発し、"ニジマスの卵や精子を生産するヤマメ"を作出した。この結果は、大型魚種の卵や精子を小型魚種に作らせることで、短期間かつ省スペースで、大型魚種の種苗生産が可能であることを示している。本研究では、小規模かつ周年での種苗生産が可能なニベを用いて、海産魚における生殖細胞移植技術を確立した。ニベは、マグロ類を含む多くの海産魚と類似した分離浮遊卵を産するため、本研究のマグロ類への応用を考えたうえで優れたモデル魚である。今年度は、ニベ同種間での精原細胞移植を行い、宿主仔魚サイズの最適化と移植後のドナー生殖細胞の挙動を追跡した。ドナー精原細胞は、2ヵ月齢ニベの未成熟精巣を分散後、蛍光試薬PKH26により標識することで調整した。生殖腺の組織学的な観察より、未熟な生殖腺原基を持つ全長3、4、5、6mmの個体を宿主に用いて移植を行い、移植3週間後において、各宿主魚の生残率、宿主生殖腺内へのドナー細胞の生着率を調べた。移植3週間後での宿主仔魚生残率は、移植時の全長が3,4,5,6mmのとき、それぞれ3,21,39,63%であった。また、生殖腺内にドナー細胞の生着が確認できた宿主個体の割合は、移植時の全長が3,4,5,6mmのとき、それぞれ50,52,10,0%であった。続いて、PKH26陽性細胞を有する宿主生殖腺より細胞塗抹標本を作成し、生殖細胞マーカーであるvasaを用いたin situ hybridization(ISH)を行ったところ、PKH26陽性細胞がvasa陽性であったことから、宿主生殖腺内に生着していたドナー由来細胞が生殖細胞であることが判明した。以上の結果から、全長4mmのニベ宿主を用いることで、高生残率かつ高効率で宿主生殖腺にドナー生殖細胞を生着させることが可能であり、精原細胞移埴が海産魚へ応用可能であることが明らかとなった。

In recent years, the applicant has developed a technology for the transfer of germ cells between fish species (proxy breeding), and has made a proposal for the production of sperm and eggs. The result is that eggs and sperm of large species can be produced in the short term, and seedlings of large species can be produced in the short term. In this study, we established the possibility of small-scale seedling production and the technology of germ cell transplantation for marine fish. The results of this study show that the fish species are similar to those of other fish species, and that the fish species are suitable for use in this study. This year, we will continue to study the process of spermatogonia transplantation among different species, optimize the host larvae, and track the post-transplant germ cell movement. After the immature sperm of spermatogonia was dispersed in 2 months, it was adjusted by light test PKH26. Histological examination of gonads, immature gonad primordia, 3, 4, 5, 6mm in length, individual to host during transplantation, 3 weeks after transplantation, survival rate of each host fish, survival rate of gonad cells in host were adjusted. The survival rate of host larvae 3 weeks after transplantation is 3, 21, 39, 63% of the total length at the time of transplantation. The total length of the host individual at the time of cleavage and transplantation was 3,4,5,6mm and 50, 52, 10,0% respectively. PKH26 positive cells were found in the host gonads, and the germ cells were found in the germ cells. The above results show that the total length of the host is 4mm, the residual rate is high, the reproductive rate is high, the host gonad is possible, and the spermatogonia is possible.

项目成果

第5章 単離生殖細胞からの魚類個体作出 : 細胞を介した遺伝子導入技法の樹立をめざして (シリーズ21世紀の農学 動物・微生物の遺伝子工学研究、日本農学会編)

第5章：从分离的生殖细胞中培育鱼类个体：旨在建立细胞介导的基因转移技术（《21世纪农业：动物和微生物的基因工程研究》丛书，日本农业学会编辑）

• 发表时间: 2007
• 作者: 吉崎悟朗;竹内裕;奥津智之
• 通讯作者: 奥津智之

海産魚における代理親魚養殖を目指した精原細胞移植技術の開発

海水鱼类代理亲鱼精原细胞移植技术的发展

• 发表时间: 2007
• 作者: Okutsu T;Yano A;Nagasawa K;Shikina S;Kobayashi T;Takeuchi Y;Yoshizaki G;樋口健太郎・三輪美砂子・竹内裕・吉崎悟朗;谷田部誉史・樋口健太郎・山本洋嗣・竹内裕・吉崎悟朗;樋口健太郎・三輪美砂子・竹内裕・吉崎悟朗
• 通讯作者: 樋口健太郎・三輪美砂子・竹内裕・吉崎悟朗

マグロのvasa遺伝子を用いた精原/卵原細胞マーカー

使用金枪鱼 vasa 基因的精原细胞/卵原细胞标记

• 发表时间: 2007

hCGによるニべの人為催熟過程におけるDHP追加投与が排卵誘起および卵質改善に及ぼす影響

黄花鱼hCG人工催熟过程中追加添加DHP对促排卵和改善蛋品质的影响

• 发表时间: 2008
• 作者: Okutsu T;Yano A;Nagasawa K;Shikina S;Kobayashi T;Takeuchi Y;Yoshizaki G;樋口健太郎・三輪美砂子・竹内裕・吉崎悟朗;谷田部誉史・樋口健太郎・山本洋嗣・竹内裕・吉崎悟朗
• 通讯作者: 谷田部誉史・樋口健太郎・山本洋嗣・竹内裕・吉崎悟朗

畜養マグロ生殖腺内におけるvasa遺伝子の発現解析

养殖金枪鱼性腺中vasa基因的表达分析

• 发表时间: 2007
• 作者: Yutaka Takeuchi;Kentaro Higuchi;Kazue Nagasawa;Misako Miwa;Goro Yoshizaki;長澤一衛・竹内裕・樋口健太郎・三輪美砂子・森田哲朗・三星亨・門村和志・吉崎悟朗
• 通讯作者: 長澤一衛・竹内裕・樋口健太郎・三輪美砂子・森田哲朗・三星亨・門村和志・吉崎悟朗