低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質LRP9遺伝子欠損マウスの作製と解析

低密度脂蛋白受体相关蛋白LRP9基因缺陷小鼠的产生和分析

• 批准号: 02J07292
• 负责人: 杉山 拓也
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J07292/
• 关键词: LRP9; 遺伝子欠損マウス; 低密度リポタンパク質; 受容体; 高脂血症; LDL受容体; 肝臓; 腎臓

申請者がクローニングした低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質LRP9の遺伝子欠損マウスの作成を継続している(Sugiyama etal. Biochemistry 39:15817-25,2000)。昨年度、129/C57BL/6キメラマウスを複数系統樹立したが、これをもとにC57BL/6マウスとバッククロスを行ったが、ジャームライン・トランスミッションが得られなかった。ES細胞のラインの問題が原因と考えられ、別ラインのES細胞(E14.1)を用いて再度、ターゲッティングベクターを電気穿孔法により導入し、薬剤選択により耐性株を得た。耐性株からDNAを抽出し、エクスターナルプローブおよびインターナルプローブを用いたサザンブロットにより相同組み換え株を複数確認した。相同組み換え株の正常な染色体数を確認したのち、マウス胚にこの相同組み換えES細胞を注入し、129/B6キメラマウスを作製した。現在、再度C57BL/6マウスへのバッククロスによるヘテロ接合体作成を試みている。マウスの作成と平行して、yeast two-hybrid systemを用い、LRP9の細胞内配列をベイトとして、LRP9が発現しているマウス肝臓のcDNAライブラリをスクリーニングした。現在得られたクローンの配列解析を行っている。また最近、マイクロアレイによる解析で、LRP9がマウス胎生13.5日の膵臓の内分泌系細胞に高発現していることが報告された(Development 131,165-179,2004)。現在、マウス膵臓の各発生段階におけるLRP9の詳細な発現解析を行っている。なお研究上の必要により、平成14年10月31日から平成16年4月30日までの予定で、Stanford University School of Medicineにおいて研究に従事している。

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