出芽酵母の可動性DNA領域VDEがゲノム中で伝播する分子機構に関する研究

酿酒酵母可移动DNA区VDE在基因组中传播的分子机制研究

• 批准号: 02J08383
• 负责人: 福田 智行
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J08383/
• 关键词: 出芽酵母; ホーミング; DNA修復; 組換え; 減数分裂; 組み換え

出芽酵母の可動性DNA領域VDEは、コードする部位特異的エンドヌクレアーゼVDEが減数分裂期特異的に染色体の二重鎖切断を誘導し、宿主がこの切断を修復することでゲノム中を動く。これらの反応機構をより詳細に解析するために、1)VDEによって切断されたDNAとDNA修復系タンパク質との結合解析、2)VDEによる切断の減数分裂期特異性を産み出す機構の解析を行った。1)VDEによる二重鎖切断末端にはRecAホモログであるDmc1pとRad51pが互いに独立に結合することをクロマチン免疫沈降法により明らかにした。また、RAD52、RAD55、RAD57遺伝子破壊株においてはいずれもRad51pの結合に欠損が見られた。一方、SAE3遺伝子破壊株ではDmc1pの結合が欠損していた。以上の結果からRad51pはRad52p、Rad55p、Rad57pの働きにより、Dmc1pはSae3pの働きによりそれぞれ独立に二重鎖切断部位にリクルートされ、修復反応をおこなうことが示唆された。2)昨年度の解析によりVDEの認識配列付近のクロマチン構造は減数分裂期に変化していることを示したが、今年度は、種々の変異株を用いた解析により、このクロマチン構造の変化は減数分裂の進行に依存していることを明らかにした。また、VDEは減数分裂誘導前にも発現しており、エンドヌクレアーゼ活性も保持していることを確認した。一方、抗VDE抗体を用いたクロマチン免疫沈降法により、VDEは減数分裂期に初めて認識配列に結合し得ることを示した。従ってVDEの減数分裂期特異的な切断はaccessibilityにより制御されており、減数分裂期に見られたクロマチン構造の変化はこのaccessibilityの上昇を反映している可能性が示唆された。

Saccharomyces cerevisiae is active in the field of DNA, the special parts of the yeast are located in the field of VDE, the chromosomes of the Saccharomyces cerevisiae are double-cut in the mitotic stage, and the host yeast is modified in the cell cycle. The anti-mechanism of the anti-computer system has been successfully analyzed, 1) the VDE has been cut off, the DNA has been repaired, and 2) the VDE has been cut off during the mitotic period. the special mechanism has been analyzed. 1) the end of the VDE was cut off. The end was RecA, the Rad51p was Dmc1p, the Rad51p was independent, combined with the immunoprecipitation method. The combination of Rad51p, RAD52, RAD55, and RAD57 was not suitable for clinical use. On the other hand, the SAE3 gene broke the strain of the virus, and the combination of the Dmc1p gene and the other side was not suitable for the treatment. As a result of the above results, Rad51p, Rad55p, Rad57p, Sae3p, and Dmc1p were found to be independent of each other. The double cutoff site was isolated, and the correction was performed. 2) for the year of last year, the VDE data were analyzed and analyzed. In the current year, all kinds of strains were used to analyze the data, and the data were analyzed in the current year. Prior to the mitosis of VDE, it is necessary to observe the activity of mitosis and maintain the activity of mitosis. On the one hand, the anti-VDE antibody was detected by immunoprecipitation method and the combination of anti-VDE antibody in the early stage of mitosis. In the case of VDE, there is an indication of the possibility that the possibility of mitosis may be abetted by reflecting the possibility of mitosis.

项目成果

Fukuda T, Nogami S, Ohya Y: "VDE-initiated intein homing in Saccharomyces cerevisiae proceeds in a meiotic recombination-like manner"Genes to Cells. 8(7). 587-602 (2003)

Fukuda T、Nogami S、Ohya Y：“酿酒酵母中 VDE 启动的内含肽归巢以类似减数分裂重组的方式进行”基因到细胞。

Nogami S, Fukuda T, Nagai Y, Yabe S, Sugiura M, Mizutani R, Satow Y, Anraku Y, Ohya Y: "Homing at an extragenic locus mediated by VDE (PI-SceI) in Saccharomyces cerevisiae"Yeast. 19. 773-782 (2002)

Nogami S、Fukuda T、Nagai Y、Yabe S、Sugiura M、Mizutani R、Satow Y、Anraku Y、Ohya Y：“在酿酒酵母中由 VDE (PI-SceI) 介导的外基因座归巢”酵母。