脱分化と分裂組織形成に関わる遺伝子SRD2の解析

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SRD2によるsnRNA転写活性化機構に関して、U2 snRNAプロモーターに存在するシス因子、USE内に変異を導入した変異型プロモーター::レポーター遺伝子(LUC)を作製し、野生型、srd2変異体のカルスでの一過的発現解析を行った。その結果、USE内に変異が入るとレポーター活性が著しく低下し、野生型プロモーター::LUCで見られるsrd2変異による温度感受性も無くなった。これはSRD2がUSEに直接的に作用して機能していることを示唆している。根断片から側根を誘導し、側根分裂組織形成におけるsnRNA蓄積量の変化とそれに対するsrd2変異の影響を、抗TMG抗体(snRNAのトリメチルグアノシンキャップ構造に対する抗体)を使った免疫組織学法で調べた。野生型では側根原基の形成に伴ってsnRNA量が増大し、一旦その蓄積量が減少した後、再び原基の付け根付近からsnRNA量が増加して、最終的には根端分裂組織での強いシグナルが検出されるというパターンを示した。これに対して、制限温度下で形成されるsrd2の(正常な分裂組織を欠いた)異常瘤状側根では、snRNA量の2回目の増大が見られなかった。以上は、SRD2によるsnRNA転写活性化が側根の分裂組織形成において重要な役割を担っていることを意味している。また、RD2遺伝子座にT-DNAが挿入された形質転換体2ラインについて解析を行った。いずれのラインにおいても、T-DNA挿入に関するホモ個体は存在せず、SRD2遺伝子機能がシロイヌナズナの生育に必須であることが確かめられた。野生型との交配実験の結果、SRD2遺伝子座へのT-DNA挿入は配偶体致死と思しき分離比を示し、特に雌性配偶体への影響が大きいことが分かった。このことから、SRD2機能は配偶体形成に必須であると考えられる。