細胞内寄生性病原体の免疫回避機構に対応したDNAワクチン・遺伝子治療の戦略的基盤

解决细胞内寄生病原体免疫逃避机制的 DNA 疫苗和基因治疗的战略基础

• 批准号: 02J09066
• 负责人: 石井 一成
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J09066/
• 关键词: DNAワクチン; 細胞内寄生性病原体; トキソプラズマ; SAG-1; ユビキチン融合遺伝子; CD8^+T細胞; PA28欠損マウス; ユビキチン-プロテアソーム; MHC ClassI

1)ユビキチン遺伝子とSAG-1遺伝子を融合させることにより、SAG-1遺伝子産物がプロテアソームでprocessingを受けること証明した。ユビキチン-SAG-1融合遺伝子をアカゲザル由来COS-7細胞にトランスフェクションを行い、その際プロテアソーム阻害剤であるMG-132,epoxomicinを添加し、SAG-1蛋白質のプロテアソームによる分解についてウエスタンブロッティング法及びデンシトメトリック法を用いることで解析を行った。2)本ユビキチン-SAG-1融合遺伝子ワクチンでは免疫プロテアソーム調節ユニットであるPA28α/βに依存しない経路を使用していることが明らかとなった。現在までのところ、プロテアソームの調節ユニットについてPA28α/βの存在が知られており、今回はユビキチン-SAG-1融合遺伝子ワクチンとトキソプラズマ感染抵抗性との関係についてPA28α/β欠損マウスを用いて解析を行った。本融合遺伝子を欠損マウスに2週間毎に4回、遺伝子銃を用いてDNAワクチンを行い、最終ワクチンの2週間後にトキソプラズマRH株を感染させた。その結果、野生型においても欠損型においてもワクチン効果が証明された。さらに両群ではSAG-1特異的CD8^+T細胞の活性化が共に認められた。3)トキソプラズマ以外の細胞内寄生性病原体である結核菌に対してもユビキチン融合遺伝子ワクチンを用いることで抗原特異的T細胞の活性化が誘導された。結核菌に対してユビキチン-Ag85B融合遺伝子ワクチン,ユビキチン-HSP65融合遺伝子ワクチンを構築し、ワクチン後、マウス脾細胞を用いたエリスポット法により抗原特異的T細胞の活性化が誘導された。

1) ユ ビ キ チ ン posthumous son 伝 と SAG - 1 heritage 伝 son を fusion さ せ る こ と に よ り, but the latter's 伝 SAG - 1 が プ ロ テ ア ソ ー ム で processing を by け る こ と prove し た. ユ ビ キ チ ン heritage - SAG - 1 fusion 伝 son を ア カ ゲ ザ ル origin COS 7 cells に ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン を い, そ の interstate プ ロ テ ア ソ ー ム resistance against tonic で あ る MG - 132, epoxomicin を add し, SAG - 1 protein の プ ロ テ ア ソ ー ム に よ る decomposition に つ い て ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン The グ method and the びデ シトメトリッ シトメトリッ シトメトリッ を を use the とで る とで とで とで とで とで とで to explain the を line った. 2) this ユ ビ キ チ ン heritage - SAG - 1 fusion 伝 son ワ ク チ ン で は immune プ ロ テ ア ソ ー ム adjust ユ ニ ッ ト で あ る PA28 alpha/beta に dependent し な い を 経 road use し て い る こ と が Ming ら か と な っ た. Now ま で の と こ ろ, プ ロ テ ア ソ ー ム の adjust ユ ニ ッ ト に つ い て PA28 alpha/beta の exist が ら れ て お り, today back to は ユ ビ キ チ ン heritage - SAG - 1 fusion 伝 son ワ ク チ ン と ト キ ソ プ ラ ズ マ infection resistance と の masato is に つ い て PA28 alpha/beta owes loss マ ウ ス を with い analytical line を っ て た. Traces of this fusion 伝 を son owe loss マ ウ ス に 2 weeks between their に 4 back, but 伝 spear を with い て DNA ワ ク チ ン を い, eventually ワ ク チ ン の between 2 weeks after に ト キ ソ プ ラ ズ マ RH strain を infection さ せ た. そ の results, wild type に お い て も owe damage type に お い て も ワ ク チ ン unseen fruit が prove さ れ た. Youdaoplaceholder0 two groups で で SAG-1 specific CD8^+T cells <s:1> activation が common に recognition められた. 3) ト キ ソ プ ラ ズ マ outside の intracellular parasitic pathogens で あ る n/med tuberculosis bacterium に し seaborne て も ユ ビ キ チ ン fusion heritage 伝 son ワ ク チ ン を with い る こ と で antigen specific T cells の activeness が induced さ れ た. N/med tuberculosis bacterium に し seaborne て ユ ビ キ チ ン heritage - Ag85B fusion 伝 son ワ ク チ ン, ユ ビ キ チ ン heritage - HSP65 fusion 伝 son ワ ク チ ン を constructing し, ワ ク チ ン, マ ウ ス spleen cells を using い た エ リ ス ポ ッ ト method に よ り の antigen specific T cells activation が induced さ れ た.

项目成果

Yamanaka A et al.: "Hyperproduction of Proinflammatory Cytokines by WSX-1-Deficient NKT Cells in Concanavalin A-Induced Hepatitis"J.Immunol.. (in press). (2004)

Yamanaka A 等人：“伴刀豆球蛋白 A 诱导的肝炎中 WSX-1 缺陷型 NKT 细胞促炎细胞因子的过度产生”J.Immunol..（出版中）。

Dainichi T et al.: "Chemical peeling with salicylic acid in polyethylene glycol vehicle suppresses skin tumour development in hairless mice."Br J Dermatol.. 906-912 (2003)

Dainichi T 等人：“在聚乙二醇载体中使用水杨酸进行化学去皮可抑制无毛小鼠的皮肤肿瘤发展。”Br J Dermatol.. 906-912 (2003)

Li Y et al.: "IL-18 gene therapy develops Th1-type immune responses in Leishmania major-infected BALB/c mice : is the effect mediated by the CpG signaling TLR9?."Gene Therapy. (in press). (2004)

Li Y等人：“IL-18基因治疗在利什曼原虫重感染的BALB/c小鼠中产生Th1型免疫反应：这种效应是由CpG信号传导TLR9介导的吗？”基因治疗。

Nshitani, M., Sakai, T., Ishii, K.et al.: "A convenient cancer vaccine therapy with in vivo transfer of interleukin 12 expression plasmid using gene gun technology after priming with irradiated carcinoma cells"Cancer Gene Therapy. 9・2. 156-163 (2002)

Nshitani, M.、Sakai, T.、Ishii, K.等人：“一种方便的癌症疫苗疗法，在用辐照的癌细胞引发后，使用基因枪技术体内转移白细胞介素 12 表达质粒”癌症基因疗法 9。 2. 156-163 (2002)

Owhashi M et al.: "Identification of a ubiquitin family protein as a novel neutrophil chemotactic factor."Biochem Biophys Res Commun.. 533-539 (2003)

Owhashi M 等人：“泛素家族蛋白作为新型中性粒细胞趋化因子的鉴定。”Biochem Biophys Res Commun. 533-539 (2003)