細胞内寄生性病原体の免疫回避機構に対応したDNAワクチン・遺伝子治療の戦略的基盤

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1)ユビキチン遺伝子とSAG-1遺伝子を融合させることにより、SAG-1遺伝子産物がプロテアソームでprocessingを受けること証明した。ユビキチン-SAG-1融合遺伝子をアカゲザル由来COS-7細胞にトランスフェクションを行い、その際プロテアソーム阻害剤であるMG-132,epoxomicinを添加し、SAG-1蛋白質のプロテアソームによる分解についてウエスタンブロッティング法及びデンシトメトリック法を用いることで解析を行った。2)本ユビキチン-SAG-1融合遺伝子ワクチンでは免疫プロテアソーム調節ユニットであるPA28α/βに依存しない経路を使用していることが明らかとなった。現在までのところ、プロテアソームの調節ユニットについてPA28α/βの存在が知られており、今回はユビキチン-SAG-1融合遺伝子ワクチンとトキソプラズマ感染抵抗性との関係についてPA28α/β欠損マウスを用いて解析を行った。本融合遺伝子を欠損マウスに2週間毎に4回、遺伝子銃を用いてDNAワクチンを行い、最終ワクチンの2週間後にトキソプラズマRH株を感染させた。その結果、野生型においても欠損型においてもワクチン効果が証明された。さらに両群ではSAG-1特異的CD8^+T細胞の活性化が共に認められた。3)トキソプラズマ以外の細胞内寄生性病原体である結核菌に対してもユビキチン融合遺伝子ワクチンを用いることで抗原特異的T細胞の活性化が誘導された。結核菌に対してユビキチン-Ag85B融合遺伝子ワクチン,ユビキチン-HSP65融合遺伝子ワクチンを構築し、ワクチン後、マウス脾細胞を用いたエリスポット法により抗原特異的T細胞の活性化が誘導された。