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遺伝子解析のためのDNAフローアレイの開発に関する研究

遗传分析用DNA流阵列的开发研究

基本信息

批准号：
02J11095
负责人：
近藤智子 (古屋智子)
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J11095/
关键词：
SNPs フローサイトメトリーフローアレイ High-throughput analysis 蛍光ゲノム

项目摘要

テーラーメイド医療やゲノム創薬に必要な情報としてSingle nucleotide polymorphisms(SNPs)が注目されており、我々は近年、注目されてきているフローアレイ技術をこのSNPs検出に応用できないかと研究を重ねてきた。本研究は複数のSNPsをhigh-throughputかつ簡便にフローサイトメーターで可能にしようとするものである。具体的にはビーズ上に固定したオリゴヌクレオチドプローブと蛍光標識されたサンプルDNAをハイブリダイズさせ、このときサンプルDNAがビーズ上のプローブDNAと完全に相補的であれば両者は結合しビーズが蛍光を発するが、相補的でなければビーズは蛍光を発さない。この差をフローサイトメーターで測定しSNPsタイピングを行なうというものである。昨年度までに合成DNAならびにゲノムDNAにおける1箇所のSNPsタイピングには成功しており、今年度は異なる直径のビーズを利用し、複数箇所SNPsの同時タイピングの確立を目指した。それぞれのSNPs箇所に対応した直径の異なるビーズを用意し、対応するオリゴヌクレオチドプローブを固定する。それらを1つのチューブの中にいれ、ゲノムDNA中のそれぞれのSNPs領域を増幅、蛍光色素でラベリングしたPCR産物を同時にハイブリダイズさせた。直径の異なるビーズ集団はフローサイトメーターで簡単に識別する可能であった。またそれぞれのビーズ集団の蛍光量を測定、解析することで1箇所の場合と同様にSNPsタイピングすることができた。合成DNAでは3箇所まで、ゲノムDNAでは2箇所までの同時タイピングをすることができた。以上のように本研究ではフローサイトメーターを用いたSNPsタイピング法を確立することができ、今後はさらにhigh-throughput性を高めるべく、開発を継続していく。

In recent years, we have been paying attention to the necessary information for medical research and development of Single nucleotide polymorphisms(SNPs), and we have been paying attention to the use of SNPs in research and development. In this study, multiple SNPs were used for high-throughput analysis. Specific to the application, the application is fixed, the application is completely complementary, and the application is combined with the application. The difference between the two is measured by SNPs. Last year, we synthesized DNA and DNA, and we successfully used one SNPs. This year, we used different SNPs and established several SNPs simultaneously. All SNPs have different diameters, and they are fixed. In addition, the PCR products were amplified and purified by PCR in the presence of SNPs in DNA. The difference in diameter between the two groups is that they can be easily identified. The amount of light in the collection is determined and analyzed. Synthetic DNA has three sites, two sites and two sites. In this study, the SNPs were used to establish the high-throughput and high-throughput characteristics.