免疫刺激魚で発現する生体防御関連遺伝子の解析

免疫刺激鱼中表达的生物防御相关基因的分析

• 批准号: 02J11358
• 负责人: 河野 智哉
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: University of Miyazaki (2003)Kagoshima University (2002)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J11358/
• 关键词: 魚類(コイ); 生体防御関連遺伝子; コルチゾール; 免疫抑制; FKBP; Cyclophilin; EST解析; CARD; BPI; LBP; CC-chemokine

本年は、免疫刺激(ストレスホルモン投与)をしたコイで発現する生体防御関連遺伝子の解析を中心に研究を進めた。初めに、コイより摘出した頭腎白血球をコルチゾールで経時的に作用させ、頭腎白血球での活性酸素産生能を測定した。その結果、非処理のコントロール郡と比べ、投与郡では有意な免疫応答の抑制が確認された。続いて、投与郡のコイ(頭腎白血球)よりcDNAライブラリーを作製し、EST's解析によって発現遺伝子の調べた。その結果、生体防御に関与する遺伝子は全体の4.8%であり、このうち、FK506/rapamycin-binding protein (FKBP)およびeyclophilin遺伝子は、魚類より初めての分離であった。続いて、これらの遺伝子の構造および各臓器における発現の解析を行った。FKBP遺伝子は、138残基のアミノ酸をコードしており、分子量13kDaであることが確認された。さらに、哺乳類のFKBPファミリーと相同性解析を行った結果、FKBP13に対し70%以上の高い相同性を示したが、FKBP12に対しては40%未満の相同性であった。このことから、コイより分離されたFKBPは、FKBP13に属している可能性が示唆された。Cyclophilin遺伝子は、166残基のアミノ酸をコードしており、分子量は約18kDaであることが確認された。哺乳類のCyclophilinファミリーとの相同性解析からは、Cyclophilin-A(17.7kDa)に対し40%以上の相同性を示し、-B (21kDa)に対しては30%程度の相同性であった。これより、コイより分離されたCyclophilinはtype-Aに類似していることが示唆された。臓器における各遺伝子の発現をRT-PCRによって確認した結果、両遺伝子ともに、通常状態の頭腎、脾臓、肝臓、脳、心臓で発現することが確認された。さらに、コルチゾールで経時的(0,1,8 and 16 hrs)に処理した各臓器での発現解析では、16時間目の肝臓、脳および心臓において、FKBPおよびCyclophilin遺伝子の発現が抑えられることが確認された。

This year, immuno-stimulation (immuno-stimulation) has made progress in the research of the center for the analysis of biological defense. The function of white blood cells in primary and secondary culture was determined by bioactive acid bioassay. The results of the test, the results, the results and the results. CDNA blood cells, white blood cells and white blood cells. The results of the experiment, the results of the study, the results of the eyclophilin results, the results of the study, the results of the results, the results of the results, the results of the study, the results of the results, the This is the first time that you can analyze the data in your computer. The molecular weight of FKBP, the molecular weight of 13kDa, and the molecular weight of the product were determined. The results of the analysis of the homology of FKBP and breast-feeding animals showed that more than 70% of the FKBP13 samples were similar, and 40% of the FKBP12 samples showed no significant differences. Please tell me that the FKBP is separated, and that the FKBP13 belongs to the possibility of instigation. The molecular weight of Cyclophilin, the molecular weight of 18kDa and the molecular weight was confirmed. The homology analysis of mammalian Cyclophilin genes, Cyclophilin-A (17.7kDa) homology,-B (21kDa) homology 30% homology. The Cyclophilin type-A type is similar to the one that indicates that you are instigated. You can see that the results of the RT-PCR test, the results of the test, the usual symptoms, the spleen, the liver, the heart, and the heart are all confirmed by the device. In the first half of the day, the first time (8 and 16 hrs), all the devices were able to analyze the data, and at 16 o'clock, the data was analyzed, and the Cyclophilin message was detected. The results show that the device is correct.

项目成果

Tomoya Kono, Riichi Kusuda, Eijiro Kawahara, Masahiro Sakai: "The analysis of immune responses of a novel CC-chemokine gene from Japanese flounder Paralichthys olivaceus"Vaccine. 21. 446-457 (2003)

Tomoya Kono、Riichi Kusuda、Eijiro Kawahara、Masahiro Sakai：“来自日本牙鲆牙鲆的新型 CC 趋化因子基因的免疫反应分析”疫苗。

Tomoya Kono, Kazuyoshi Okamoto, Masahiro Sakai: "Analysis of expressed sequence tags from a yellowtail Seriola quinqueradiata head kidney cDNA library"Aquaculture Research. 33. 1-7 (2002)

Tomoya Kono、Kazuyoshi Okamoto、Masahiro Sakai：“黄尾鰤头肾 cDNA 文库表达序列标签的分析”水产养殖研究。

H.Kawano, T.Kono, H.Watanuki, R.Savan, M.Sakai: "The analysis of expressed genes in head kidney of common carp Cyprinus carpio L.treated with cortisol"Comparative Biochemistry and Physiology. 136・4. 875-886 (2003)

H.Kawano、T.Kono、H.Watanuki、R.Savan、M.Sakai：“用皮质醇处理的鲤鱼头肾的表达基因分析”比较生物化学和生理学 136・4。 -886 (2003)

Tomoya Kono, Kazuhiro Fujiki, Miki Nakao, Tomoki Yano, Makoto Endo, Masahiro Sakai: "The immune responses of carp, Cyprinus carpio, infected with carp interleukin-1β gene"The Journal of Interferon and Cytokine Research. 22. 413-419 (2002)

Tomoya Kono、Kazuhiro Fujiki、Miki Nakao、Tomoki Yano、Makoto Endo、Masahiro Sakai：“感染鲤鱼 IL-1β 基因的鲤鱼的免疫反应”干扰素和细胞因子研究杂志 22. 413-419（ 2002）

Tomoya Kono, Hironobu Watanuki, Masahiro Sakai: "The activation of interleukin-1β in serum of carp, Cyprinus carpio, injected with peptidoglycan"Aquaculture. 212. 1-10 (2002)

Tomoya Kono、Hironobu Watanuki、Masahiro Sakai：“注入肽聚糖的鲤鱼血清中白细胞介素 1β 的激活”水产养殖。