Microdissection法を用いたモノクロナール抗体作製による食道がんの発

使用显微切割方法生产单克隆抗体诱导食管癌

• 批准号: 13670199
• 负责人: 中西 幸浩
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13670199/
• 关键词: 食道がん; microdissection; モノクローナル抗体; 浸潤先進部

予備実験としてMicrodissection法を用いることによりどの程度効率的にモノクロナール抗体の作製ができるかをまず検討した。5mm角の食道がん凍結切片(厚さ5 micron)の腫瘍間質部分のみをlaser capture microdissection(LCM)法により採取し、組織片を回収するのに用いた合成樹脂性のmembrane30枚、20枚、10枚、2枚をそれぞれマウスの腹腔内に挿入し、3週間後に免疫染色にてtiter checkを行った。Membrane2枚を免疫したマウスでも免疫組織化学的に食道がん腫瘍間質に一致して陽性所見が見られる抗体が得られ、LCM法を用いることにより微量検体からでも抗体作製が可能であることがわかった。次に、食道がんの発生、進展に関わる重要分子の同定のための抗体作製を試みた。免疫源としてリンパ節転移が多数ある食道がんの浸潤先進部をLCM法で採取した凍結組織を用いた。上記と同様の方法で切り取った組織片の付着したmembrane5枚をマウスの腹腔内に挿入し免疫した。系統の違うマウス各2匹づつを用いた。Titerの高かったマウスから型の如くcell fusionを行い、2種のmonoclonal抗体を得た。1つのmonoclonal抗体は、非がん上皮ではcell-cell borderに染色され、浸潤先進部では腫瘍細胞の細胞質に発現の亢進を示していた。他の1つのmonoclonal抗体は、非がん上皮や大型胞巣を形成する腫瘍では基底膜様の染色性を示し、小型胞巣を形成する腫瘍では発現の低下を示していた。現在さらにそれらの抗体の特性の解析を進めている。

Reserve be 験 と し て を Microdissection method with い る こ と に よ り ど の degree working rate に モ ノ ク ロ ナ ー ル antibody の cropping が で き る か を ま ず beg し 検 た. 5mm Angle <s:1> esophageal がん frozen section (thick さ5 micron) <s:1> interstitial part of the abscess <e:1> みをlaser capture Microdissection method (LCM) に よ り take し, tissue slice を back 収 す る の に with い た synthetic resin sex の membrane30, 20, 10, 2 rings を そ れ ぞ れ マ ウ ス の intra-abdominal に scions into し, after 3 weeks に immune dyeing に て titer check line を っ た. Membrane2 medal を immune し た マ ウ ス で も immunohistochemical esophageal が に ん swollen sores interstitial に consistent し が て positive see see ら れ が る antibodies to ら れ, LCM を with い る こ と に よ り trace 検 body か ら で も が the antibody cropping could で あ る こ と が わ か っ た. The development and progression of に and がん in the esophagus に are related to the わる important molecule <e:1>, the determination of ため, and the production of を test みた by ため antibodies. Immune source と し て リ ン パ festival planning move が most あ る esophagus が ん の infiltration method を LCM part advanced で take し た frozen tissue を with い た. The above record states that the と method is the same as the で method, で cut and <s:1> take った tissue slices, <s:1> attach <s:1> たmembrane, 5 を ウス ウス <e:1>, and に insert an immunized tissue た into the abdominal cavity. The system has 2 horsepower each for う and ウス and uses た た for づ and を. High Titer の か っ た マ ウ ス か ら の type such as く cell fusion line を い, two の た を monoclonal antibody. 1 つ の は monoclonal antibody, non が ん epithelial で は cell - cell border に dyeing さ れ, infiltrating advanced で の は swollen sores cell cytoplasm に 発 is の hyperthyroidism を shown し て い た. He の 1 つ の は monoclonal antibody, non が ん epithelial や large cell 巣 を form す る swollen sores で は basement membrane others の dyeing を し, small cell 巣 を form す る swollen sores で は 発 now low の を shown し て い た. Now さらにそれら <s:1> antibody <s:1> properties <e:1> analysis を into めて めて る る.

项目成果

Imamura M, Nakanishi Y, et al.: "Prognostic significance of CyclinD1 and E-Cadherin in patients with esophageal squamous cell carcinoma : Muitiinstitutional retrospective analysis."J Am Coll Surg. 192. 708-718 (2001)

Imamura M、Nakanishi Y 等人：“CyclinD1 和 E-Cadherin 对食管鳞状细胞癌患者的预后意义：多机构回顾性分析。”J Am Coll Surg。

Nakanishi Y, et al.: "Clinicopathological significance of tumor nest configuration in patients with esophageal squarnous cell carcinoma."Cancer. 91(6). 1114-1120 (2001)

Nakanishi Y 等人：“食管鳞状细胞癌患者肿瘤巢结构的临床病理学意义。”癌症。

Katoh K, Nakanishi Y, et al.: "Correlation between laminin-5γ2 chain expression and epidermal growth factor receptor expression and its clinicopathologic significance in squamous cell carcinoma of the tongue."Oncology. (in press). (2002)

Katoh K、Nakanishi Y 等人：“层粘连蛋白 5γ2 链表达与表皮生长因子受体表达之间的相关性及其在舌鳞状细胞癌中的临床病理意义。”肿瘤学（2002 年）。

Aoki S, Nakanishi Y, et al.: "Prognostic significance of laminin-5γ2 chain expression in colorectal carcinoma : Immunohistochemical analysis of 1 03 cases."Dis Colon Rectum. (in press). (2002)

Aoki S、Nakanishi Y 等人：“结直肠癌中层粘连蛋白 5γ2 链表达的预后意义：1 03 例的免疫组织化学分析”。Dis Colon Rectum（出版中）。

Igaki H, Nakanishi Y, et al.: "Prognostic evaluation for squamous cell carcinoma of the lower thoracic esophagus treated with three-field lymph node dissection."Eur J Cardio-thorac Surg. 19. 887-893 (2001)

Igaki H、Nakanishi Y 等人：“用三野淋巴结清扫术治疗下胸段食管鳞状细胞癌的预后评估。”Eur J Cardio-thorac Surg。