磁気細胞分離システムを用いた大腸癌スクリーニング法の開発

利用磁性细胞分离系统开发结直肠癌筛查方法

• 批准号: 13670561
• 负责人: 須藤 一郎
• 金额: $ 0.32万
• 依托单位: Tokyo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13670561/
• 关键词: 大腸癌; 糞便; 便潜血検査

1.糞便CEA、CA IIの測定:carbonic anhydlase II(CA II)やCEAは大腸癌細胞内に豊富に存在するが、糞便中に出現する機序としては単一ではなく、癌以外の組織や体液、血球など複数の因子が関与しているとされている。そこでまず、健常者ならびに大腸癌患者の糞便蛋白の定量を行い、出血や血漿蛋白漏出のマーカーである糞便hemoglobin(Hb)やalbumin(Alb)、α1 antitrypsin(α1 AT)濃度と比較検討した。その結果、(1)大腸癌患者の糞便CA II、CEA濃度はともに健常者に比べ有意に高かった。(2)健常者において糞便CA II高濃度の検体がみられ、糞便Hb、Alb、α 1AT濃度と有意に相関した。CA IIは癌細胞以外にも赤血球中に高濃度に含まれるため、健常者にみられる高い糞便CA II濃度には、Hb、Alb、α 1ATと同様に、痔疾等の出血機序が少なからず関与していると考えられる。(3)健常者における糞便CEA濃度も高値の検体がみられたが、出血や血漿蛋白漏出のマーカーの糞便濃度との相関はCA IIの場合に比べ低かった。健常者の糞便中には、癌組織由来のCEAときわめて類似したCEA関連抗原(NFA-1、NFA-2、NFCAなど)が存在し、免疫学的にはこれらの物質を識別できないことが本結果をもたらしたと推察される。2.磁気細胞分離システムによる糞便からの上皮細胞の分離:HEPES 緩衝液で希釈分散した糞便に、上皮細胞の糖ペプチド膜抗原に対する特異抗体Ber-EP4を結合したビーズを混和し上皮細胞(膜)を分離した。本研究では、大腸癌患者におけるDNA量およびCA II濃度は報告例(Loktionov A et al. Clinical Cancer Research,4,337-342,1998)に比べ低い結果となった。この差異は、本研究における凍結保存便の使用により生じた可能性が考えられ、今後新鮮便を用いた検討を予定している。

1. Determination of CEA and CA II in feces:carbonic anhydrase II(CA II) and CEA are abundant in colorectal cancer cells, and the mechanism of their occurrence in feces is related to multiple factors in tissues, fluids and blood cells other than cancer. Fecal protein quantification in patients with colorectal cancer, bleeding, plasma protein leakage, and fecal hemoglobin(Hb), albumin(Alb), and α1 antitrypsin(α1 AT) concentrations were compared. Results: (1) The concentrations of CA II and CEA in stool of colorectal cancer patients were higher than those of healthy patients. (2)In healthy individuals, high concentrations of CA II in faeces were significantly correlated with Hb, Alb and α 1AT concentrations in faeces. CA II concentrations in erythrocytes other than cancer cells are high, and in healthy individuals are high. Faecal CA II concentrations in erythrocytes, Hb, Alb, α 1AT, hemorrhoids, and other bleeding mechanisms are low. (3)In healthy individuals, the concentration of CEA in feces is higher than that in healthy individuals, and plasma protein leakage is lower than that in healthy individuals. CEA associated antigens (NFA-1, NFA-2, NFCA) are present in the stool of healthy individuals, and the origin of cancer tissue is also detected. 2. Magnetic cell separation:HEPES buffer is used to disperse the fecal and epithelial cell membrane antigens, and the specific antibody Ber-EP4 is used to isolate the epithelial cells. In this study, DNA levels and CA II concentrations in patients with colorectal cancer were lower than those reported (Loktionov A et al. Clinical Cancer Research,4,337- 342, 1998). The differences between frozen and fresh samples are discussed in this study.