シナプス特異的蛋白ZNF231/Bassoonの機能解析

突触特异性蛋白ZNF231/Bassoon的功能分析

• 批准号: 13670633
• 负责人: 橋田 秀司
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13670633/
• 关键词: シナプス蛋白; Znフィンガー; 分子生物学

1、我々は、ZNF231/Bassoon cDNAの塩基配列から導きだしたアミノ酸配列を元に合成ペプチドを作成、ウサギに免疫し抗体を作成した。我々のC端18アミノ酸に対する抗体は、ラット大脳 粗ホモジェネートにておよそ420kDaの分子量の蛋白を認識し、免疫染色では、ラットの小脳顆粒層のglomerulusが濃く染色された。一般にglomerulusは、苔状線維のシナプス終末を中心とした構造であり、ZNF231/Bassoonがシナプスに豊富に存在していることの反映と考えられた。現在ZNF231/Bassoon蛋白のシナプス内の存在様式について免疫電顕にて検討を行うとともに、ホルマリン固定脳における染色性を改善するための条件検討を行っている。また、新たにN端17アミノ酸の合成ペプチドに対する抗体も作成し現在精製中である。2、また現在、ZNF231/BassoonのcDNAを用いて、yeast two hybrid systemによるスクリーニングを行っている。ZNF231/Bassoon cDNAのdouble zinc fingerドメインをもつZNF231-12cDNA(5`端〜1842nt)とglutamine rich regionをもつZNF231-07cDNA(6858〜8203nt)、ZNF231-04cDNA(1128〜1243nt)をpGBK T7ベクターに現在サブクローニングし、クロンテックMATCHMAKER human brain pretransformed library をスクリーニング中である。

1. ZNF231/Bassoon cDNA sequence is synthesized and antibodies are produced. Our C-terminal 18-amino acid-resistant antibodies are highly sensitive to protein with a molecular weight of 420kDa. Immunostaining is performed on the glomerulus of the small granular layer. General glomerulus, moss-like line dimension, terminal structure, ZNF231/Bassoon, rich in existence, reflection Now, the expression pattern of ZNF231/Bassoon protein in the protein was studied. The synthesis and purification of the new N-terminal 17-amino acid 2. The cDNA of ZNF231/Bassoon is used in the present, and the cDNA of the two hybrid systems is used in the future. ZNF231/Bassoon cDNA has double zinc finger. ZNF231- 12 cDNA (5`-1842nt) and glutamine rich region. ZNF231- 07 cDNA (6858 ~ 8203nt) and ZNF231- 04 cDNA (1128 ~ 1243nt) are now in pGBK T7.