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Znフィンガー因子の系統的遺伝子単離と転写調節における機能の解析

锌指因子的系统基因分离及其转录调控功能分析

基本信息

批准号：
09770073
负责人：
縣保年
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、発生や細胞分化に重要な役割を果たしているKruppelタイプZnフィンガー(Kruppel-ZF)遺伝子を系統的に単離し、その転写調節機能を解析することを目的とし、まずPCRに基づく効率のよいKruppel-ZF遺伝子単離法を用いて多数の新規遺伝子を単離した。そのうち2つの新しいKuppel-ZF蛋白(Mszf42/49のちにMRAZ1/2と改名)が、MRAB(Kuppel Associsted Box)と呼ばれる特徴的なドメインを持ち、GAL4DNA結合ドメインと融合させると、MRABドメインとGAL4結合配列に依存して転写を抑制することを見い出した。さらにMRAZ1/2のMRABドメインと、KAP-1(MRAB Associated Protein-1)と呼ばれる蛋白が特異的に結合するとともに、KAP-1自身に強い転写抑制活性があることを明らかにした。そこでKAP-1のKRABとの結合ドメインと転写抑制ドメインを詳細に決定したのちに、KRAZ1/2,とKAP-1が細胞内で機能的に結合しうるかmarmma1ian two-hybrid assayにより検討した。すなわちKAP-1とVP16転写活性化ドメインの融合蛋白を、GAL4KRAZl/2と共発現させると、転写抑制ドメインを欠失したKAP-1変異体では、GAL4-KRAZ1/2によって抑制されていた転写が、逆に顕著に活性化されたのに対して、全長のKAP-1では転写抑制ドメインが優勢に働き、転写は抑制された。これらの結果から、KRAZ1/2,とKAP-1が実際に細胞内で相互炸用し、さらにはKAP-1が、MRAB-ZF蛋白との複合体において機能的なco-repressorとして転写を抑制することを初めて証明した。

In this study, it is very important to analyze the data of the Kruppel system and the Zn cluster (Kruppel-ZF) sub-system in this study. In this study, most of the new rules are used to analyze the purpose of the system, the rate of the Kruppel-ZF cluster, the rate of failure and the number of data in the system. The new Kuppel-ZF protein (Mszf42/49 protein renamed MRAZ1/2), the MRAB (Kuppel Associsted Box) protein, the fusion protein, the GAL4DNA fusion protein, the Kuppel Associsted Box protein, the dependency protein, the suppression protein, the fusion protein, the dependency write, the suppression, the fusion, the fusion, the dependency, the write, the write, the suppression, the fusion, the dependency, the write, the write, the inhibition, the fusion, the dependency, the dependency, the write, the write, the suppression, the fusion, the dependency, the dependency. The combination of MRAZ1/2, MRAB, and KAP-1 (MRAB Associated Protein-1) protein specific proteins, and the strong writing inhibition activity of KAP-1 itself were detected. In combination with the combination of KAP-1 and KRAB, the suppression of marmma1ian two-hybrid assay, the determination of KRAZ1/2, the combination of marmma1ian two-hybrid assay and intracellular mechanical energy, the combination of DNA and DNA, the combination of molecular weight, the level of intracellular mechanical energy, and the level of intracellular mechanical energy, the combination of molecular weight and intracellular energy. KAP-1 VP16 write activation fusion protein, GAL4KRAZl/2 write inhibition, write inhibition. The results of the experiments, KRAZ1/2, KAP-1, KAP-1, and MRAB-ZF protein complex in the cell were used to suppress the molecular weight of the co-repressor virus.