B細胞の分化初期に発現するZnフィンガー因子の遺伝子単離と解析

B细胞分化早期表达的Zn指因子的遗传分离与分析

• 批准号: 08770086
• 负责人: 縣 保年
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770086/
• 关键词: 転写因子; Kruppel; Znフィンガー; B細胞分化; lipopolysaccharide; Interleukin-4; RT-PCR; Anchored PCR

本研究では、B細胞の分化初期に発現するKruppel型Znフィンガー転写因子の遺伝子を単離・解析することを目的とし、モデル系としてLPSとIL-4で刺激したマウス脾細胞から、保存された配列を標的としたRT-PCR法により効率的に遺伝子単離を行なうシステムの確立を試みた。まず標的配列に対応する混合プライマーに、アンカー配列を付加したAnchored PCRを行ない、、目的とするZnフィンガー遺伝子を特異的かつ効率よく増幅することを可能とし、さらにベクターを改変し挿入する遺伝子とLacZ遺伝子の読み枠を合わせ、目的とする組み換え体をより効率よく選別できるようにした。現在までに65種類のZnフィンガー遺伝子を単離し、そのうち62種は未知であった。次にこれら多くのクローンの中から、特定の分化段階や刺激によって特異的に発現するようなものを選択するために、LPS/IL-4刺激あるいは無刺激のマウス脾細胞から、それぞれ同様にZnフィンガー遺伝子をRT-PCRにより調製したものけプローブとして、刺激した細胞由来の遺伝子ライブラリーをスクリーニングした結果、刺激により有意に発現が増強される遺伝子を単離することができた。この遺伝子は細胞癌化との関連性が示唆されており、機能的に大変興味深い。さらにこの遺伝子を含むいくつかのクローンの全長cDNAを単離したところ、Kruppel型Znフィンガー転写因子のサブファミリーにおいて、転写を抑制あるいは活性化することが示唆されている遺伝子の機能領域と、高い相同性を有する3つの新しい遺伝子が存在することがわかった(論文投稿中)。今後は、B細胞の初期分化をin vitroで誘導できる骨髄細胞あるいは胚性幹細胞培養系のようなきわめて少ない細胞を取り扱う系から、この高感度かつ簡便なZnフィンガー遺伝子の単離および選択システムにより、実際に新しい遺伝子の単離を試みるとともに、本研究で単離した遺伝子の転写に対する調節機能に関しても解析を行なっていく予定である。

In this study, in the early stage of differentiation of Zn cells, we found that Kruppel type LPSIL-4, IL-4, IL-4, IL-4, The arrangement of the Zn, the mix, the line, the Objective to determine the accuracy of the selection of health care providers. At present, in the category of Zn 65, the number of children is separated, and the number of unknown information is not known. In the middle, specific segments of differentiation, specific segments, splenocytes, spleen cells, spleen cells, spleen cells, The reason for the stimulation of the cells of the children is that the results of the stimulation of the cells of the children, the children of the children. The cancer of the cells and the connection between the cells and the organs show that they have a deep smell. The full-length cDNA of the system contains the full length of the data, the Kruppel type of Zn, the write factor, the suppression factor, the activation factor, the data domain, the high homogeneity, the presence of the data, and the presence of the data in the submission. In the future, the initial differentiation of in vitro and B cells will lead to the development of embryonic cells, embryogenic cells, embryonic cells, embryonic cells, In this study, we are able to analyze the data in the system and determine the number of predetermined data in this study.