コンビケムによる合成ペプチド固相試薬の開発

Combichem开发合成肽固相试剂

基本信息

批准号：
13750750
负责人：
中村成夫
金额：
$ 1.54万
依托单位：
University of Miyazaki (2002)Kyushu University (2001)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、ゲスト分子との錯形成を情報変換することにより分子センサとしての機能を持たせた合成ペプチドを、コンビケム手法により開発することである。ペプチドを樹脂上で合成し、そのままターゲット分子との相互作用に用いることができるかどうかを検討した。前年度に合成した樹脂担持型ペプチドは350nm以下の光を吸収し、発色基のスペクトルを妨害していると思われた。これを避けるには、p-ニトロフェノールよりも長波長側に吸収極大を持つアゾ色素を情報変換部位として樹脂担持型ペプチドに導入し、フローセルにより吸収スペクトルを測定した。しかし、スペクトル測定結果を見ると、500nm以下の光を吸収してしまい、吸収極大は見られなかった。アミンの添加に伴うスペクトル変化についても、スペクトルは変化したものの、吸収極大は見られなかった。一方、蛍光強度変化により、ホストーゲスト間の相互作用を検出できれば、より、高選択性、高感度の検出が期待できる。また、樹脂に光を透過させる吸光度測定に対し、樹脂が光を発する蛍光測定では、前述のような吸光度測定の際の問題を考慮せずに測定ができるので、より高速なライブラリの構築、及びスクリーニングが可能になる。そこで、樹脂担持型ペプチドに導入する蛍光色素の検討を行った。樹脂担持型ペプチドに導入する蛍光色素として、FITC(florescein-5-isotiocyanate)を選択した。FITCは、カルボン酸のプロトン解離によって蛍光強度が増加する蛍光物質である。また、ペプチドN末端への導入が容易に行える蛍光ラベル化剤である。FITCを樹脂担持型ペプチド(Leu-Leu-Leu)に導入し、マイクロブレートリーダーを用いて蛍光強度測定を行った。アミン濃度増加に伴い蛍光強度の増加が見られたものの、コントロール樹脂と蛍光増加に大きな違いは見られなかった。

这项研究的目的是开发具有分子传感器功能的合成肽，通过将信息转换为与客人分子的复杂形成。研究了是否可以在树脂上合成肽并直接用于与靶分子相互作用。在上一年合成的树脂支撑的肽吸收了低于350 nm的光，并被认为会干扰发色基的光谱。为了避免这种情况，将P-亚硝基苯酚波长最大吸收的偶氮染料引入了树脂支持的肽中作为信息转换位点，并使用流动池测量吸收光谱。但是，从光谱测量结果中，它吸收了低于500 nm的光，并且没有观察到最大吸收。随着胺的添加，光谱变化也发生了变化，但没有观察到最大吸收。另一方面，如果由于荧光强度的变化而可以检测到宿主和来宾之间的相互作用，则可以预期具有更高的选择性和灵敏度的检测。此外，在通过树脂通过树脂传输光的吸光度测量的情况下，可以在不考虑上述吸光度时进行荧光测量，而无需考虑这些问题，从而可以以更快的速度构建和筛选库。因此，研究了要引入树脂支撑肽的荧光染料。选择FITC（氟列赛蛋白-5-异氰酸酯）作为将其引入树脂支持的肽的荧光染料。 FITC是一种荧光物质，由于羧酸的质子解离，其荧光强度增加。它也是一种荧光标记剂，可以轻松地引入肽的N末端。将FITC引入树脂支持的肽（Leu-Leu-Leu）中，并使用微蓝色读取器测量荧光强度。尽管荧光强度随胺浓度的增加而增加，但对照树脂和荧光增加之间没有观察到显着差异。