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シロアリ類の消化管内β-グルコシダーゼの精製と解析

白蚁胃肠道β-葡萄糖苷酶的纯化及分析

基本信息

批准号：
13760043
负责人：
徳田岳
金额：
$ 1.28万
依托单位：
University of the Ryukyus
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度は、昨年度にコウシュンシロアリの唾液腺から部分精製したβ-グルコシダーゼを用いて、酵素学的な解析を行った。まず、セロビオースを基質としてβ-グルコシダーゼの諸性質を検討した。Lineweaver-Burkプロットにより、K_m値を求めたところ2.5mMであった。しかし、部分精製酵素であるため、V_<max>値を求める事はできなかった。PHに対する反応について検討したところ、最適pHは5.6であり、pH4〜7の間で、最大活性の50%以上の活性を保持することがわかった。また、様々な温度条件に対して酵素活性を調べたところ、20〜45℃の間で安定に活性を保つことがわかった。しかしながら、55℃以上の温度で酵素溶液をインキュベートしたところ、30分以内に完全に失活した。これらの性質について、キノコシロアリ亜科に属するMacrotermes mulleriから精製されたβ-グルコシダーゼAと比較したところ、大きな違いは認められなかった。次に、様々な基質に対して酵素活性の変化を検討したところ、シロアリ唾液腺β-グルコシダーゼはp-nitrophenyl-β-D-fucosideやラミナリビオースをよく分解したが、p-nitrophenyl-β-D-galactosideやラクトースはほとんど分解しないことがわかった。また、ゲンチビオース、ラミナリン、およびサリシンは全く分解しなかった。このことから、この酵素が、グルコピラノシドのβ-1,4結合だけでなく、β-1,3結合も潜在的に分解しうる能力を持つ事が明らかとなった。さらに、これらの基質特異性の結果から、このβ-グルコシダーゼが3つのクラスに分類されている昆虫β-グリコシダーゼのうち、クラス1β-グリコシダーゼというカテゴリーに属することが明らかとなった。

This year, the salivary glands were partially refined, and enzyme analysis was performed. The properties of the matrix are discussed. Lineweaver-Burk Some of the refined enzymes were found to be in the middle of the process<max>. pH: pH: 5.6, pH: 4 ~ 7, maximum activity: 50% or more The enzyme activity is regulated according to the temperature condition, and the activity is kept stable between 20 and 45℃. The enzyme solution is completely inactivated at temperatures above 55℃ and within 30 minutes. The nature of the game is different, the game is different, the game is different. The enzyme activity of p-nitrophenyl-β-D-galactoside is the most important factor in the degradation of p-nitrophenyl-β-D-galactose. All of the above are not applicable. The enzyme has the ability to bind to β-1,4 and β-1,3 molecules, and the ability to bind to β-1,3 molecules. In addition, the results of these basic characteristics are different from those of the previous ones. The β-groups are classified into three categories: β-groups, β-groups, β-groups, β-